
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:結(jié)腸彎曲菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P63598
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
石蠟切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
外消旋5-羥甲基托特羅定 rac 5-Hydroxymethyl Tolterodine 200801-70-3 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
環(huán)丙沙星(標(biāo)準(zhǔn)品) Ciprofloxacin 85721-33-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)胞培養(yǎng)污染性支原體M.orale鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
丙草胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%) Pretilachlor 51218-49-6 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%
大黃酸 Rhein 478-43-3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BR
半乳糖苷酶釋放法細(xì)膜損傷熒光檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
肌氨酸 Sarcosine 107-97-1 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
匹格列酮-d4 Pioglitazone-d4 111025-46-8 (unlabeled) 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:1%硝酸) Nickel standard 7440-02-0 質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:1%硝酸
羅硝唑 Ronidazole 7681-76-7 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物亞油酸(linoleic acid)比色法測定試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
N-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N)) N-Butylbenzenesulfonamide 3622-84-2 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)
奈替米星 Netilmicin 56391-56-1 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
通用型丁酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
咖啡酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Caffeic acid 331-39-5 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
結(jié)腸彎曲菌PCR檢測試劑盒革蘭氏染色液 英文名稱:Gram Staining 產(chǎn)品規(guī)格:5ml*8 產(chǎn)品用途:用于細(xì)革蘭氏染色試驗1.涂片經(jīng)火焰固定,加(結(jié)晶紫溶液)溶液A染1分鐘,用清水沖去染液。2.加(碘液)溶液B染1分鐘,水洗。3.加(脫色液)溶液C,不時搖動玻片約10-30秒,至無紫色脫落為止,水洗。4.加溶液D,染1分鐘,水洗。5.干后油鏡鏡檢。陽性呈紫色、陰性呈淡紅色。
山梨醇麥康凱瓊脂添加劑 英文名稱:Sorbitol MacConkey Agar Additives 產(chǎn)品規(guī)格:1ml*5 產(chǎn)品用途:每200mlHB0121培養(yǎng)基中添加1支(含頭孢克肟0.01mg和亞碲0.5mg)每支添加于200ml山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)中貯存:2-8℃條件下,保質(zhì)期一年。
mEC肉湯 英文名稱:mE.Coli Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于0157選擇性增(USDA-FSIS方法)用途:用于大腸桿O157 :H7選擇性增培養(yǎng)。用法:稱取本品 37.0g,加熱溶解于 1000ml蒸餾水中,分裝 三角瓶,每瓶 225ml,121℃高壓滅 15 分鐘,冷卻后,加入過濾除的新生霉素 1 支 (4.5mg),使*終濃度為 20ug/ml混勻,加入樣品液后,放置42℃水浴培養(yǎng)18-24小時。
mTSB肉湯 英文名稱:mTSB Broth With Novobiocin 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于0157選擇性增(ISO方法)用途用于O157選擇性增。用 法稱取本品33克,加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中,分裝每瓶225ml,121℃高壓滅15分鐘備用。。質(zhì)量控制和典型特征接種10-100個大腸桿O157于本培養(yǎng)基中,41.5℃培養(yǎng)18-24h,應(yīng)生長明顯,溶液混濁。
改良山梨醇麥康凱(CT-SMAC)瓊脂 英文名稱:Modified Sorbitol Maconkey Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于大腸桿O157的分離培養(yǎng)(GB)標(biāo)準(zhǔn)用途:用于 O157 的選擇性分離培養(yǎng)。成分(g/L)蛋白胨 20.0山梨醇 10.0三號膽鹽 1.5氯鈉 5.0中性紅 0.03結(jié)晶紫 0.001瓊脂 15.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法稱取本品 51.5g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,每瓶 200ml,121℃高壓滅 15 分鐘冷至 45℃± 1℃左右時,加入一支改良山梨醇麥康凱瓊脂添加劑( 含頭孢克肟 0.01mg,亞碲 0.5mg),混勻 ,傾入無平皿,備用。
改良山梨醇麥康凱瓊脂添加劑 英文名稱:Modified Sorbitol MacConkey Agar Additives 產(chǎn)品規(guī)格:1ml*5支 產(chǎn)品用途:每支添加于200ml改良山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)中每支添加于200ml改良山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)中保存:2-8℃,有效期:一年