實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：麻疹病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P63630
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

細(xì)β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

環(huán)黃芪醇 Cycloastragenol 84605-18-5 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

泰諾福韋磷酸鹽 Tenofovir Phosphate 206646-04-0 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

去[5-(2-二甲氨基)乙基]地爾硫卓 Des[5-(2-dimethylamino)ethyl] Diltiazem 87447-47-0 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

肉類乙酸比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

脂蛋白脂酶活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

唑來磷酸（標(biāo)準(zhǔn)品） Zoledronic acid hydrate 165800-06-6 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

丹酚酸D(標(biāo)準(zhǔn)品) Salvianolic acid D 142998-47-8 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

大米蛋白化學(xué)萃取試劑盒  進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次（10克/次）

水質(zhì)汞元素比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

苯磺酸氨氯地平（絡(luò)活喜、安洛地） Amlodipine Besylate 111470-99-6 質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP 6.4,BR

頭孢哌酮;頭孢哌酮酸 Cefoperazone Acid 62893-19-0 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

純化線粒體膜通道孔（MPTP）比色法檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

二硫代乙酰胺(>98%,BR) Dithiooxamide 79-40-3 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動(dòng)物細(xì)胞N-乙酰轉(zhuǎn)移酶1（NAT1）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

L-精氨酸-α-酮戊二酸鹽（2:1） L-Arginine AKG 2:1 5256-76-8 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

麻疹病毒PCR檢測試劑盒腦心浸液瓊脂（BHIA） 英文名稱：Brain Heart infusion Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于營養(yǎng)苛求細(xì)的增培養(yǎng)用途:營養(yǎng)豐富，用于培養(yǎng)各種細(xì)。成分(g/L)牛腦浸粉 4.0牛心浸粉 4.0蛋白胨 5.0酪蛋白胨 16.0氯鈉 5.0葡萄糖 2.0磷酸氫二鈉 2.5瓊脂 13.5pH值7.4 ± 0.2 25℃用法稱取本品 52.0g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

Pfizer腸球選擇性瓊脂（PSE瓊脂） 英文名稱：Pfizer Enterococcus Selective Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于糞鏈球的選擇性分離（SN標(biāo)準(zhǔn)）用途用于食品中糞鏈球選擇性分離培養(yǎng)。成分（g/L）蛋白胨 20.0g酵母浸粉 5.0g牛膽汁物 10.0g氯鈉 5.0g檸檬酸鈉 1.0g檸檬酸鐵銨 0.5g 0.25g七葉苷 1.0g瓊脂 15.0gpH值 7.1±0.2用 法稱取本品57.75克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝， 121℃高壓滅15分鐘，備用。

6.5%NaCl葡萄糖瓊脂 英文名稱：6.5% NaCl Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于腸球高鹽耐受生長試驗(yàn)用途:用于腸球高鹽耐受生長試驗(yàn)。成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0葡萄糖 1.0氯鈉 65.0溴紫 0.015瓊脂 13.0pH值7.4±0.1 25℃用法稱取本品 92.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)（改良） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于鏈球等苛求培養(yǎng)產(chǎn)品用途：營養(yǎng)非常豐富，用于鏈球等苛求培養(yǎng)（加入5-10%脫纖維羊血）產(chǎn)品用法：稱取本品 39g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶 121℃高壓滅 15 分鐘,冷至 50℃左右時(shí),加入 5%無脫纖維羊血,混勻,傾入無平皿。貯存方法：放置陰涼干燥處保存

乙基紫疊氮鈉肉湯（litsky肉湯） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于鏈球增培養(yǎng)產(chǎn)品用途：用于鏈球增培養(yǎng)。產(chǎn)品用法：稱取本品35.7g，加熱溶解于1000ml 蒸餾水中，分裝16mm*160mm試管，每管10ml，121℃高壓滅15min，備用。

疊氮葡萄糖肉湯 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于鏈球增培養(yǎng)產(chǎn)品用途：用于鏈球增培養(yǎng)。產(chǎn)品用法：稱取本品35.6g，加熱溶解于1000ml 蒸餾水中，分裝16mm*160mm試管，每管10ml，121℃高壓滅15min，備用。注：制備雙料培養(yǎng)基時(shí)，稱取本品71.2g，加熱溶解于1000ml 蒸餾水中，分裝18mm*180mm試管，每管10ml，121℃高壓滅15min，備用。

MC培養(yǎng)基（不含瓊脂） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于嗜熱鏈球增培養(yǎng)稱取本品61.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅15min，備用