實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：非洲豬瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P63672
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法：
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

 石蠟切片組織PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅（ZIEHL-NEELSEN）原位染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

(R)-美托洛爾 (R)-Metoprolol 81024-43-3 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

N-氧基曲唑酮 Trazodone N-Oxide 55290-68-1 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

二苯胺（DPA）DNA比色法定量測(cè)定試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次

2,2'-二辛可寧酸(>98.0%(HPLC)) 2,2'-Bicinchoninic Acid 1245-13-2 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

鹽酸丙卡巴肼(標(biāo)準(zhǔn)品) Procarbazine HCl 366-70-1 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

促腎上腺皮質(zhì)(1-24), 人 ACTH (1-24), human 16960-16-0 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

頭孢噻肟鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefotaxime Sodium 64485-93-4 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定

體液?jiǎn)伟费趸福?/span>MAO）總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

硝酸芬替康唑; 硝酸芬康唑 Fenticonazole Nitrate 73151-29-8 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

創(chuàng)傷?。?/span>Vibrio vulnificus）鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

6-FAM, SE;6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 6-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester 92557-81-8 質(zhì)量規(guī)格：0.9

酞菁二鋰(>93.0%(N)) Dilithium Phthalocyanine 25510-41-2 質(zhì)量規(guī)格：>93.0%(N)

TUBULIN蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：25次

精喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%) Quizalofop-p-ethyl 100646-51-3 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

非洲豬瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒Preston肉湯基礎(chǔ) 英文名稱：Preston Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于空腸彎曲桿的選擇性增用途:用于空腸彎曲桿選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)牛肉浸粉 10.0蛋白胨 10.0氯鈉 5.0酸鈉 0.25焦鈉 0.25硫酸亞鐵 0.25pH值7.0± 0.2 25℃用法稱取本品 25.75g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,每瓶 200ml,121℃高壓滅 15 分鐘,冷至 50℃左右時(shí),每瓶加入一支 Preston肉湯添加劑和 10ml 無裂解馬血,混勻,分裝試管,備用。注：本培養(yǎng)基高壓滅后有沉淀物。

布氏肉湯添加劑 英文名稱：Brucella Broth Additive 產(chǎn)品規(guī)格：2ml*5 產(chǎn)品用途：每支加入225ml布氏肉湯中產(chǎn)品用法：每支加入225ml布氏肉湯中

波爾頓選擇性肉湯 英文名稱：Bolton Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于空腸彎曲選擇性增培養(yǎng)用途:用于空腸彎曲選擇性增培養(yǎng)成分(g/L)動(dòng)物組織酶解物 10.0乳白蛋白水解物 5.0酵母浸粉 5.0氯鈉 5.0α-酮戊二酸 1.0酸鈉 0.5偏氫鈉 0.5碳酸鈉 0.6氯血紅素 0.01pH值7.4 ± 0.2 25℃用法稱取本品 27.6g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,每瓶 225ml ,121℃高壓滅 15 分鐘,冷至 45 -50℃時(shí) ,每瓶培養(yǎng)基中加入 12.25ml 無裂解脫纖維羊或馬血和 1支 Bolton 肉湯添加劑,混勻,備用。注：培養(yǎng)基高壓滅后有一些小黑色顆粒。

甘露醇卵黃多粘素瓊脂基礎(chǔ)（MYP） 英文名稱：Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于蠟樣芽孢桿的固體平板計(jì)數(shù)（GB.SN標(biāo)準(zhǔn))用途:用于蠟樣芽孢桿的固體平板計(jì)數(shù)成分(g/L)蛋白胨 10.0甘露醇 10.0牛肉粉 1.0氯鈉 10.0酚紅 0.025瓊脂 15.0pH值7.2 ± 0.1 25℃用法稱取本品 46.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝每瓶 100ml,經(jīng) 121℃高壓滅 15 分鐘,待培養(yǎng)基冷卻至 50℃時(shí),每瓶加入 50% 卵黃乳液 5ml 及多粘素B 10000IU,搖勻,傾入無平皿。

胰酪胨大豆多粘素肉湯基礎(chǔ) 英文名稱：Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于蠟樣芽孢桿的MPN值測(cè)定產(chǎn)品用途：用于蠟樣芽孢桿的MPN值測(cè)定 (SN標(biāo)準(zhǔn))產(chǎn)品用法：稱取本品3.0克，加熱溶解于100ml蒸餾水中，煮沸2分鐘，121℃高壓滅15分鐘，冷至50℃左右時(shí)，加入1支多粘素B（ 2.25萬單位），混勻，無分裝于滅試管，備用。質(zhì)量控制與典型特征：接種10-100個(gè)蠟樣芽孢桿，30℃培養(yǎng)48小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好，溶液混濁。

改良V-P培養(yǎng)基 英文名稱：V-P Medium,Modified 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于蠟樣芽孢桿的V-P試驗(yàn)用途用于蠟樣芽孢桿的V-P試驗(yàn)。成分（g/L）胰蛋白胨 7.0g葡萄糖 5.0g氯鈉 5.0gPH值　6.5±0.1用 法稱取本品17克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝試管，每管5ml，121℃高壓滅10分鐘備用。質(zhì)量控制和典型特征蠟樣芽孢桿在35℃培養(yǎng)48小時(shí)，加入V-P試劑及肌酸數(shù)滴，靜止1小時(shí)，溶液變?yōu)橐良t色，為陽(yáng)性反應(yīng)。

胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱：Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于蠟樣芽孢桿的溶血測(cè)試驗(yàn)用途用于蠟樣芽孢桿的溶血測(cè)試驗(yàn)。成分（g/L）胰酪胨 15.0g大豆胨 5.0g氯鈉 5.0g瓊脂　15.0gPH值 6.8-7.2用 法稱取本品4.0克，加熱攪拌溶解于100ml蒸餾水中，分裝燒瓶，每瓶100ml，121℃高壓滅15分鐘，冷至45－50℃時(shí)加入5ml無脫纖維羊血，混勻后傾注平板，每平皿18-20ml.質(zhì)量控制和典型特征在30-32℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，蠟樣芽孢桿典型特征為在落周圍呈現(xiàn)β型完全溶血的溶血環(huán)。

酪蛋白瓊脂 英文名稱：Casein Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于蠟樣芽孢桿的酪蛋白分解試驗(yàn)用途:用于蠟樣芽孢桿的酪蛋白分解試驗(yàn)。成分(g/L)酪蛋白 10.0牛肉浸粉 3.0氯鈉 5.0磷酸氫二鉀 2.0瓊脂 15.0溴百里香酚蘭 0.05pH值7.4 ± 0.1 25℃用法稱取本品 35.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 20 分鐘,備用。注：酪蛋白不溶解,本培養(yǎng)基有沉淀物。