產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：口蹄疫病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P63686
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

血液丙二醛（MDA）比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

2-羥基阿托伐他汀內(nèi)酯-d5 2-Hydroxy Atorvastatin Lactone-d5 265989-50-2 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

嗎替甲基麥考酚酯N-氧基(環(huán)氧樹脂雜質(zhì)G) Mycophenolate Mofetil N-Oxide (EP Impurity G) 224052-51-1 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

通用型KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS）病毒定量PCR擴增檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

咖啡酸 Caffeic acid 331-39-5 質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR

細(xì)胞FGR激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

基因甲基化特異性PCR擴增（MSP）試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：60次

體液人體鼻病毒（rhinovirus）定性檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

蛋白樣品賴氨酸層析法去內(nèi)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

S(+)-2-氨基-1-丁醇 (S)-(+)-2-Amino-1-butanol  5856-62-2 質(zhì)量規(guī)格：>99%,液態(tài),0.944 g/mL ,25℃

異脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%) [3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide standard solution 36734-19-7 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%

動物指（趾）甲DNA萃取試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

托瑞米芬 Toremifene  89778-26-7 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

鹽酸阿糖胞苷 1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl 69-74-9 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PAR-2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：100微克

橙皮素(標(biāo)準(zhǔn)品) Hesperitin 520-33-2 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

口蹄疫病毒PCR檢測試劑盒萘啶酮酸(4.0mg) 英文名稱：Nalidixic Acid 產(chǎn)品規(guī)格：4.0mg*5 產(chǎn)品用途：添加于200ml李氏增肉湯添加于200ml李氏增肉湯中

七葉苷培養(yǎng)基 英文名稱：Esculin Medium 產(chǎn)品規(guī)格：10 產(chǎn)品用途：如需使用，請以七葉苷代替。如需使用，請以七葉苷代替。

牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ) 英文名稱：Oxford Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于單增李氏的選擇性分離（SN標(biāo)準(zhǔn)）用途用于李斯特氏的分離培養(yǎng)。成分（g/L）特殊蛋白胨 23.0g可溶性淀粉 1.0g氯鈉 5.0g七葉苷 1.0g檸檬酸鐵銨 0.5g氯鋰　15.0g瓊脂　13.0gPH值 7.0±0.2用 法稱取本品5.85克，加熱溶解于100ml蒸餾水中， 121℃高壓滅15分鐘，冷至50℃時，加入多粘素E（2mg）、（40mg）、黃素（0.5mg）、頭孢雙硫唑甲氧（0.2mg）、磷霉素（1mg），混勻，傾入無平皿，備用。

緩沖李氏增肉湯基礎(chǔ)(BLEB) 英文名稱：Buffered Listeria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于李氏的增培養(yǎng)（FDA標(biāo)準(zhǔn)）用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)。用法稱取本品 48.0g,溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝,每瓶225ml,121℃高壓滅 15 分鐘,冷至室溫,加入 25g 樣品,30℃培養(yǎng) 4 小時,再加入 1支混合(萘啶酮酸9mg、黃素 2.25mg、 11.25mg),混勻,繼續(xù)30℃培養(yǎng) 48 小時。

PALCAM瓊脂 英文名稱：PALCAM Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于單增李氏選擇性分離（FDA標(biāo)準(zhǔn)）用途:用于單增李斯特氏的選擇性分離。成分(g/L)蛋白胨 23.0可溶性淀粉 1.0酵母浸粉 3.0D-甘露醇 10.0七葉苷 0.8檸檬酸鐵銨 0.5D-葡萄糖 0.5氯鋰 15.0瓊脂 13.0氯鈉 5.0酚紅 0.08pH值7.2 ± 0.2 25℃用法稱取本品 71.9g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,每瓶 200ml, 121℃高壓滅15分鐘,冷至 50℃左右時,加入 1 套 PALCAM 瓊脂添加劑( 添加劑 1 和添加劑 2 ),混勻傾入無平皿。

Half–Fraser培養(yǎng)基 英文名稱：Half-Fraser Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于李氏的增培養(yǎng)用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)胰酪蛋白胨 5.0蛋白胨 5.0牛肉粉 5.0酵母粉 5.0氯鈉 20.0磷酸氫二鈉 12.0磷酸二氫鉀 1.35七葉苷 1.0氯鋰 3.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法稱取本品 55.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝,每瓶225ml,121℃高壓滅 15 分鐘 冷至 50℃左右時,加入 1 支 FB1添加劑 A 和 1 支 FB1 添加劑 B 混勻,備用

Fraser培養(yǎng)基 英文名稱：Fraser Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于李氏的增培養(yǎng)用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)胰酪蛋白胨 5.0蛋白胨 5.0牛肉粉 5.0酵母粉 5.0氯鈉 20.0磷酸氫二鈉 12.0磷酸二氫鉀 1.35七葉苷 1.0氯鋰 3.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法稱取本品 55.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘,冷至50℃時,分裝 225ml,若加入1 支 FB1 添加劑 A 和 1 支FB1 添加劑 B 制成 FB1(Half-Fraser ) 培養(yǎng)基;分裝100ml,若加入 1 支 FB2 添加劑 A 和 1 支 Fb2 添加劑B 制成 FB2 ( Fraser ) 培養(yǎng)基,混勻,備用。PALCAM添加劑1

PALCAM添加劑1 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml/支*5 產(chǎn)品用途：添加于200ml添加于200ml PALCAM瓊脂基礎(chǔ)中，用于李氏的選擇性分離培養(yǎng)

LPM瓊脂 英文名稱：LPM Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于單增李氏選擇性分離（加入七葉苷和檸檬酸鐵銨）（FDA標(biāo)準(zhǔn)）用途:用于單增李斯特氏的分離培養(yǎng)。用法稱取本品 50.5g,加熱攪拌溶解于1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘，冷至 45-50℃左右時，加入過濾除的拉氧頭孢(Moxalactam)20mg混勻，傾入無平皿。 注：也可以加入 1g 七葉苷和 0.5g 檸檬酸鐵銨至 1L 培養(yǎng)基中。

改良緩沖蛋白胨水（MBP） 英文名稱：Modified Buffered Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于單增李氏前增培養(yǎng)（SN標(biāo)準(zhǔn)）產(chǎn)品用途：用于單增李氏前增培養(yǎng)（SN標(biāo)準(zhǔn)）產(chǎn)品用法： 稱取本品 25.5g ,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶每瓶 225ml, 121℃高壓滅15 分鐘備用。使用前每瓶中加入鹽酸黃素 2.7mg 和萘啶酮酸 4.4mg,充分振搖, 混合均勻。