實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：弓形蟲PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P63778
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

乙基2-(6-氨基-2,3-二氯芐)甘氨酸(阿那格雷雜質(zhì)A) Ethyl 2-(6-Amino-2,3-dichlorobenzyl)glycine(Anagrelide Impurity A) 70406-92-7 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

細(xì)血液瓊脂平板 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50個

蘋果酸脫氫酶(>12,000U/ml，BC) Malate dehydrogenase 9001-64-3 質(zhì)量規(guī)格：>12,000U/ml，BC

通用型大腸桿（E. Coli）鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

洛沙坦鉀/氯沙坦鉀 Losartan Potassium 124750-99-8 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

2,2'-聯(lián)-4-勒皮啶 2,2'-Bi-4-lepidine 7654-51-5 質(zhì)量規(guī)格：

熒光素二鉀 Uranine K 6417-85-2 質(zhì)量規(guī)格：熒光染料

二苯并-24-冠8-醚(>98.0%(GC)) Dibenzo-24-crown 8-Ether 14174-09-5 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

聚乙二醇10000 PEG 10000 25322-68-3 質(zhì)量規(guī)格：分子量9,000~11,000

HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：2次

咽側(cè)體抑制素Ⅳ Allatostatin IV 123338-13-6 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

奧利司他（發(fā)酵） Orlistat(Fermentation) 96829-58-2 質(zhì)量規(guī)格：純度≥98. 0%，含量(HPLC)(On dried basis)≥98.5%，單雜≤1.0%。

萊苞迪甙A Rebaudioside A 58543-16-1 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動物組織β-半乳糖苷酶活性超敏熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

Galeterone (TOK001) TOK-001 851983-85-2 質(zhì)量規(guī)格：>98%,CYP17抑制劑

細(xì)胞單胺氧化酶（MAO）總活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

弓形蟲PCR檢測試劑盒HBI副溶血性弧生化鑒定條(SN) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5條/盒 產(chǎn)品用途：用于副溶血性弧的生化鑒定。(SN標(biāo)準(zhǔn))用于副溶血性弧的生化鑒定，每條包括：無鹽胨水、3%NaCl胰胨水、7%NaCl胰胨水、10%NaCl胰胨水、3%NaClVP半固體、賴氨酸脫羧酶、精氨脫羧酶、氨基酸脫羧酶對照、O/F試驗(2孔)、蔗糖發(fā)酵管、42℃生長共12種生化反應(yīng)。(SN標(biāo)準(zhǔn))1、實驗準(zhǔn)備：從包裝盒中取出一條生化鑒定條，打開蓋子，用打孔器開孔或直接把膜撕掉。如果染或變色，則不能使用，重新拿一條。注：打孔器用75%酒精擦拭后使用。2、接種方法：從選擇性瓊脂平板(TCBS瓊脂或弧顯色培養(yǎng)基)上至少選取2個典型落或可疑落，每個落分別接種到無鹽胰胨水、3%氯鈉胰胨水、氯鈉三糖鐵瓊脂進(jìn)行鑒別試驗，本生化鑒定條不含氯鈉三糖鐵瓊脂。其它的生化管是否進(jìn)行接種，請參照SN/0173-2010標(biāo)準(zhǔn)。懸液法：取一內(nèi)盛2ml無鹽水試管，用接種針從分離純化平板上挑取1-2個落至無鹽水中仔細(xì)研磨制成0.5麥?zhǔn)蠞舛鹊木患?xì)懸液，每孔加入100ul懸液,其中固體和半固體生化管采用穿剌接種。鳥氨酸、精氨酸、賴氨酸和氨基酸對照需加滅石蠟覆蓋液面。3、接種完后做好標(biāo)記，蓋上蓋子，放入底托中，放置36℃±1℃培養(yǎng)（42℃生長置42℃培養(yǎng)）。4、培養(yǎng)結(jié)束后，放在記錄卡上觀察。

HBIO157生化鑒定條（GB） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5條/盒 產(chǎn)品用途：用于大腸桿0157:H7/NM生化鑒定。（GB標(biāo)準(zhǔn)）用于大腸桿0157:H7/NM生化鑒定，每條包括：山梨醇、色氨酸肉湯(蛋白胨水)、MR-VP( 2孔)、氧化酶試紙、西蒙氏枸椽酸鹽、鳥氨酸、賴氨酸、氨基酸脫羧酶對照、纖維二糖、棉子糖、動力試驗共12生化反應(yīng)。（GB標(biāo)準(zhǔn)）使用方法：1、實驗準(zhǔn)備：從包裝盒中取出一條生化鑒定條，打開蓋子，用打孔器開孔或直接把膜撕掉。如果染或變色，則不能使用，重新拿一條。注：打孔器用75%酒精擦拭后使用。2、接種方法：取初步生化試驗后的可疑落，劃線接種到營養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純化培養(yǎng)(36±1℃培養(yǎng)18-24h)，取純化落做氧化酶試驗和接種山梨醇、靛基質(zhì)(蛋白胨水)、MR-VP 2支、西蒙氏枸櫞酸鹽、鳥氨酸、賴氨酸、氨基酸脫羧酶對照、纖維二糖、棉子糖、半固體動力試驗。請參照GB/T4789.36標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。懸液法：取一內(nèi)盛2ml無鹽水試管，用接種針從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取單個落至無鹽水中仔細(xì)研磨制成均一細(xì)懸液，每孔加入100ul懸液。其中動力試驗采用穿剌接種，鳥氨酸、賴氨酸和氨基酸對照需加滅石蠟覆蓋液面。3、 接種完后做好標(biāo)記，蓋上蓋子，放入底托中，放置36℃±1℃培養(yǎng).4、 培養(yǎng)結(jié)束后，放在記錄卡上觀察。