細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	A375+EGFP人惡性黑色素瘤細(xì)胞+EGFP	英文名稱	A375+EGFP:A375EGFP
產(chǎn)品貨號	A01X644	培養(yǎng)條件
生長特性	貼壁生長	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	詳見說明
組織來源	人黑色素瘤	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

細(xì)胞介紹

 A375源自一位54歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。該細(xì)胞可在抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆。

 A375-EGFP是在 A375細(xì)胞上用慢病毒標(biāo)記上EGFP，可以顯示綠色熒光，帶有嘌呤霉素抗性。

細(xì)胞特性

1） 來源：人黑色素瘤

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10?  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

血清類粘蛋白1樣蛋白1+2+3抗體    ORMDL1 + ORMDL2 + ORMDL3

鈣結(jié)合蛋白39抗體    CAB39

Toll樣受體2抗體  Anti-TLR2/CD282    血小板源性生長因子A抗體  Anti-PDGF-A

磷酸化丙酮酸脫氫酶α1抗體  Anti-phospho-PDHA1(Ser293)    SUGT1蛋白抗體  Anti-SUGT1

環(huán)氧化物水解酶1抗體    Epoxide hydrolase 1

動力蛋白輕鏈   DYNLT1

鋅指蛋白ZBTB6抗體  Anti-ZBTB6/ZNF482    鈉鉀離子轉(zhuǎn)運蛋白1抗體  Anti-NKCC1

環(huán)指蛋白130抗體  Anti-RNF130    三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員8抗體  Anti-STSL/ABCG8

大鼠P21蛋白(P21)elisa分析檢測試劑盒    P21 ELISA Kit

人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)elisa分析檢測試劑盒    MPIF-1ELISAKit

細(xì)胞半胱-10（CASPASE-10）活性熒光定量檢測試劑盒    人P物質(zhì)（SP）elisa檢測試劑盒

大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa分析檢測試劑盒    小鼠腎上腺素能受體β1(ADRβ1)elisa檢測試劑盒

LSM5蛋白抗體    LSM5

A375+EGFP人惡性黑色素瘤細(xì)胞+EGFP轉(zhuǎn)錄因子BTF3抗體    BTF3

17β羥類固醇脫氫酶14/17β-HSD14抗體    HSD17B14

Fyn結(jié)合蛋白抗體    ADAP/FYB

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。