實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠頜下腺上皮細(xì)胞分離自頜下腺組織；頜下腺是下頜部的唾液腺，左右各一個(gè)。頜下腺屬于唾液腺的一種，主要的功能就是分泌唾液。機(jī)體共有三大唾液腺，包括腮腺、頜下腺及舌下腺。頜下腺位于下頜骨的下方，接近下頜骨彎曲角附近，所以也叫下頜下腺（下頜骨下方的唾液腺），左右各一，由舌下舌系帶兩側(cè)處伸出頜下腺排泄管，主要分泌黏液和漿液狀性質(zhì)的唾液。頜下腺上皮細(xì)胞是一種高度分化的上皮細(xì)胞，在體外難以長(zhǎng)期存活和保持分化狀態(tài)；頜下腺的主要病理變化有：①頜下腺炎；②頜下腺囊腫；③頜下腺腫；④頜下腺結(jié)石。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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頜下腺組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1614 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠頜下腺上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠頜下腺上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
MouseAnti-CyclicCitrullinatedPeptideAntibody(Anti-CCP-antibody)ELISAkit
大鼠B細(xì)胞κ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)elisa分析檢測(cè)試劑盒
Rat NFKBIE ELISA Kit
人肝素-血小板因子4復(fù)合物抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanHeparin-Plateletfactor4ComplexantibodyIgGELISAKit
轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白1抗體 Anti-TTI1
c-Myc應(yīng)答蛋白抗體 Anti-RCL/c Myc responsive
磷酸化谷氨酸受體1抗體 Anti-Phospho-NMDAR1(Ser897)
血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體 Anti-VEGFR2/FLK1
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子HOXD9抗體
HOXD9
細(xì)胞分裂周期蛋白5抗體
APC5
驢黃體**素(LH)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
石蠟切片總舒爾茨間接染色試劑盒
小鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠半乳糖凝集素7(GAL7)elisa檢測(cè)試劑盒
原鈣粘蛋白β7抗體
PCDHB7
艾滋病病毒Nef抗體
HIV1 Nef
磷酸化羥化酶抗體 Anti-Phospho-TH (Ser31)
絲裂原活化蛋白激酶p38α抗體 Anti-p38MAPK/MAPK14/p38Alpha
過氧化酶活化受體γ2抗體 Anti-PPAR gamma 2
突觸相關(guān)蛋白29抗體 Anti-SNAP29
PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG H&L
大鼠頜下腺上皮細(xì)胞Mouse Anti-Guinea Pig IgG H&L / PE-Cy5
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子11抗體
GRIK2+GRIK3; G protein coupled receptor family C group 1 member F; GLR 6; GLR6; GLUR 6; GluR-6; GLUR6; Glutamate receptor 6; Glutamate receptor; Glutamate receptor ionotropic kainate 2; Gprc 1f; Gprc1f; GRIK 2; GRIK2; GRIK2 protein; GRIK2_HUMAN; GRM 6; ionotropic kainate 2; EAA5; Excitatory amino acid receptor 5; GLR 7; GLR7; GLU R7; GLUR 7; GluR 7a; GluR-7; GLUR7; GluR7a; Glutamate receptor 7; Glutamate receptor; Glutamate receptor ionotropic kainate 3; GRIK 3; GRIK3; GRIK3_HUMAN; ionotropic kainate 3.
大鼠滑膜成纖維細(xì)胞
豬垂體細(xì)胞
BJ人皮膚成纖維細(xì)胞
A-431人表皮鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。