培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
大鼠牙齦成纖維細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
牙齦組織
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
成纖維細胞樣
分類
大鼠原代細胞
貨號
A01X1742
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
大鼠牙齦成纖維細胞分離自牙齦組織；牙齦指緊貼于牙頸周圍及鄰近的牙槽骨上淡紅色的結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮及固有層組成。是口腔黏膜的一部分，血管豐富，呈淡紅色，堅韌而有彈性，因缺乏黏膜下層，直接與骨膜緊密相連，故牙齦不能移動。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠牙齦成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的大鼠牙齦成纖維細胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
IL-1raELISAkit
魚金屬硫蛋白(MT)elisa分析檢測試劑盒
MT ELISA kit
人補體蛋白5(C5)elisa分析檢測試劑盒
C5ELISAKit
協(xié)轉(zhuǎn)運蛋白4-A4抗體 Anti-SLC4A4
RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab35抗體 Anti-RAB35
軸突生長誘向因子G2抗體 Anti-Netrin G1/G2
Wnt蛋白家族7B抗體 Anti-WNT7B
毛發(fā)角蛋白37抗體
KRT37/KRT38
Bcl2樣凋亡蛋白9抗體
Bcl 2 like protein 9
亞硫酸鹽氧化酶抗體 Anti-Sulfite oxidase/SUOX
磷酸化細胞遷移誘導(dǎo)因子5抗體 Anti-phospho-RAC1(Ser71)
磷酸化1型神經(jīng)纖維瘤抗體 Anti-phospho-NF1(Ser2515)
鋅指蛋白239抗體 Anti-ZNF239
電壓門控鈉離子通道型α4抗體
SCN4A
膠原樣蛋白抗體
COL20A1
鈉通道蛋白10α抗體 Anti-SCN10A/NAV1.8
前動力蛋白2抗體 Anti-PROK2/Prokineticin 2
血小板源性生長因子AA+BB抗體 Anti-PDGFAA + PDGFBB
磷酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體 Anti-Phospho-TIF1 beta(Ser824)
羊抗豚鼠IgG H&L
大鼠牙齦成纖維細胞Goat Anti-Guinea Pig IgG H&L
鋅指蛋白690抗體
FLJ23741; Fork head related protein like B; Forkhead box P1; Forkhead box protein P1; 12CC4; foxp1; FOXP1_MOUSE; FOX P1; FOXP 1; Glutamine rich factor 1; hFKH1B; HSPC215; MGC12942; MGC88572; MGC99551; QRF 1; QRF1.
大鼠牙齦上皮細胞
小鼠胃黏膜上皮細胞
HL 60（hl-60）人早幼粒白血病細胞
BT-549人乳腺導(dǎo)管癌細胞
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。