
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
兔輸卵管上皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
輸卵管
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
上皮細胞樣
分類
兔原代細胞
貨號
A01X2118
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):上皮細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔輸卵管上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介:
兔輸卵管上皮細胞分離自輸卵管組織;輸卵管位于底兩側(cè),包裹在闊韌帶上緣內(nèi)。自兩角分別伸展至左、右卵巢,是輸送卵細胞進入的管道,也是卵受精的場所。輸卵管主要分漏斗部、壺腹部、峽部和部,管壁均由粘膜、肌層和漿膜三層組成。粘膜形成許多縱行而分支的皺襞,壺腹部的皺襞,高而多分支,故管腔不規(guī)則;至部的皺襞漸減少。粘膜上皮為單層柱狀。由纖毛細胞和分泌細胞組成。纖毛細胞以漏斗部和壺腹部多,至峽部和部逐漸減少,纖毛向方向擺動,使卵移向并阻止病菌進入腹膜腔.分泌細胞表面有微絨毛,頂部胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒,其分泌物構(gòu)成輸卵管液。輸卵管上皮細胞在卵巢雌和孕的作用下,隨月經(jīng)周期而有變化。雌促進輸卵管上皮細胞的生長的功能活動,在內(nèi)膜增生晚期(排卵前)。纖毛細胞變成高柱狀,纖毛增多,分泌細胞頂部充滿分泌顆粒,功能旺盛。至分泌晚期,兩種細胞均變矮,分泌細胞的分泌顆粒排空,纖毛細胞的纖毛也減少。
方法簡介:
實驗室分離的兔輸卵管上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔輸卵管上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa檢測試劑盒
大鼠抵抗素樣α(Retnla)elisa檢測試劑盒免費代測
小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)elisa檢測試劑盒
人鼻病毒(RV)抗體(IgA)elisa檢測試劑盒
組織磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠促腎上腺皮質(zhì)素釋放受體2(CRHR2)elisa檢測試劑盒
植物脊髓過氧化酶(MPO)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒
人丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)elisa分析檢測試劑盒
色氨酸豐富蛋白抗體 WRB
神經(jīng)肽Y受體4抗體 NPY4R
Mob1源蛋白MOBKL2C抗體 MOBKL2C
NDUFB8蛋白抗體 NDUFB8
周期素依賴性激酶2重組兔單克隆抗體 Cdk2
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體 PATZ1
谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶抗體 GST1
海棠(植物) 14-3-3蛋白抗體 14-3-3 family protein
腺泡狀軟組織肉瘤結(jié)構(gòu)域蛋白ASPC抗體 ASPSCR1
鋅指蛋白175抗體 ZNF175
白細胞介素28抗體 IL-28
苯丙氨酸羥化酶4單克隆抗體 PAH
cereblon蛋白抗體 CRBN
DHTKD1蛋白抗體 DHTKD1
磷酸化p21激活激酶1/3抗體 phospho-PAK1 (Ser144) + PAK3 (Ser154)
磷酸化三磷酸腺苷依賴解旋酶ddx5抗體 phospho-DDX5 (Tyr593)
冰凍切片磷酸化酶活性染色試劑盒
兔輸卵管上皮細胞人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)elisa分析檢測試劑盒
大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)elisa檢測試劑盒
Bardet-Biedl syndrome 7; Bardet-Biedl syndrome 7 protein; BBS2-like 1; BBS7_HUMAN.
兔輸尿管上皮細胞
兔主動脈弓內(nèi)皮細胞
TU212人喉癌細胞
HEK-293A人胚腎細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。