培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠鞏膜成纖維細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
鞏膜組織
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
成纖維細胞樣
分類
小鼠原代細胞
貨號
A01X1991
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳1-3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
小鼠鞏膜成纖維細胞分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜，后方與視神經(jīng)的鞘膜延續(xù)。鞏膜在視神經(jīng)穿出部附近厚，愈前愈薄，在肌腱附著處又復(fù)增厚。其與角膜交界處，外面有環(huán)形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍色，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結(jié)構(gòu)堅韌，有支持和保護眼內(nèi)組織的作用。成纖維細胞是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠金屬硫蛋白2(MT-2)elisa分析檢測試劑盒
小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)elisa檢測試劑盒
化妝品阿斯巴塘（aspartame）含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒
植物超氧化物歧化酶（SOD）亞型制備試劑盒
檸檬酸（CA）含量測試盒
小鼠神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)elisa檢測試劑盒
大鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)elisa檢測試劑盒
細胞PKG-Iα激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)elisa分析檢測試劑盒
鋅指蛋白781抗體 ZNF781
信號通路Wnt9a抗體 WNT9A
赤霉素抗體 Gibberellins
單鏈結(jié)合蛋白70抗體 RPA70
EIF1AD蛋白抗體 EIF1AD
FAM123C蛋白抗體 FAM123C
磷酸化絲氨酸/蘇氨酸/抗體 Phospho-Serine/Threonine/Tyrosine
磷酸化胸苷激酶1抗體 phospho-Thymidine Kinase 1 (Ser13)
組織相容性抗原HLAF單克隆抗體 HLA-F
1號染色體開放閱讀框125抗體 C1orf125
環(huán)氧化物水解酶1抗體 EPHX1
活性依賴的神經(jīng)保護肽抗體 ADNP
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人/小鼠CD11b單克隆抗體 human/mouse CD11b/PerCP-Cy5.5
PE標(biāo)記人IL-4單克隆抗體 human IL-4/PE
生長分化因子3抗體 GDF3
水通道蛋白-7抗體 AQP7
大鼠糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)elisa檢測試劑盒
小鼠鞏膜成纖維細胞單寧含量試劑盒
人谷氨酸脫羧酶65(GAD65)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
MCP-1/CCL2; C-C motif chemokine 2; CCL 2; CCL2; CCL2_RAT; Chemokine (C C motif) ligand 2; Chemokine C C motif ligand 2; Chemokine CC Motif Ligand 2; GDCF 2; GDCF 2 HC11; GDCF-2; GDCF2; HC11; HSMCR30; HSMCR30; JE; MCAF; MCP 1; MCP-1; MGC9434; Monocyte chemoattractant protein 1; Monocyte chemotactic and activating factor; Monocyte chemotactic protein 1; Monocyte secretory protein JE; SCYA2; Small inducible cytokine A2 (monocyte chemotactic protein 1, homologous to mouse Sig je); Small inducible cytokine A2; Small inducible cytokine subfamily A (Cys Cys), member 2; Small inducible cytokine subfamily A Cys Cys member 2; Small-inducible cytokine A2; SMC CF; SMC-CF; SMCCF.
小鼠骨骼肌成纖維細胞
兔輸尿管上皮細胞
HL-1小鼠心肌細胞
HS746T人胃癌細胞
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。