
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠骨髓單核細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
骨髓
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
巨噬細胞樣
分類
小鼠原代細胞
貨號
A01X1939
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 巨噬細胞樣
傳代特性 不增殖;不傳代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
小鼠骨髓單核細胞分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能**紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括、病毒等;某些細胞能**抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單核細胞是一種未成熟的單核細胞,在骨髓細胞中約占0.04%,被認為是破骨細胞的前體細胞,較外周血單個核細胞誘導(dǎo)的破骨細胞得率高、全骨髓誘導(dǎo)法產(chǎn)生的破骨細胞數(shù)量多,純度高,較脾細胞誘導(dǎo)法分化效率高。骨髓單核細胞(BMMNCs)是從股骨或脛骨骨髓中分離提取出來的原代細胞,它屬干細胞類型。目前,大多數(shù)研究用細胞分離液分離提取骨髓單核細胞,近也有采用磁珠分離法分離骨髓單核細胞。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠骨髓單核細胞采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠骨髓單核細胞經(jīng)CD68熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa檢測試劑盒免費代測
小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)elisa檢測試劑盒
大鼠成纖維細胞生長因子11(FGF11)elisa檢測試劑盒
組織氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)活性比色法定量檢測試劑盒
人白三烯B4(LTB4)elisa檢測試劑盒免費代測
小鼠神經(jīng)型一氧化氮合酶(NOS1)elisa檢測試劑盒
大鼠肌球蛋白重鏈1(MYH1)elisa檢測試劑盒
細胞PRAK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
人肌細胞**素(MYOG)elisa分析檢測試劑盒
中心體蛋白1+2抗體 Centrin-1+Centrin-2
腫瘤抑制基因p53抗體 p53 (FL-393)
干擾素α抗體 IFNA13
谷氨酸受體1抗體 NMDAR1
KPNA6蛋白抗體 KPNA6
MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體 TRIB2
熱休克蛋白105抗體 HSP105
絨毛膜特異性轉(zhuǎn)錄因子GCM2抗體 GCM2
BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 SLX4/BTBD12
CD3抗體 CD3
利鈉肽受體A抗體 Natriuretic Peptide Receptor A
磷酸化C端結(jié)合蛋白1抗體 phospho-CTBP1 (Ser422)
γ-谷氨酰羧化酶抗體 GGCX
白介素1β/IL-1β重組兔單克隆抗體 IL-1 beta
細胞色素P450 2B6抗體 Cytochrome P450 2B6
纖維鞘相互作用蛋白2抗體 FSIP2
犬CD4分子(CD4)elisa檢測試劑盒
小鼠骨髓單核細胞細胞COLLAGEN I蛋白表達熒光定量檢測試劑盒
小鼠白介素1β(IL-1B)elisa檢測試劑盒
MBLX; CHCR; Cys3His CCG1 required protein; MBLX39; MBNL 3; MBXL; Muscleblind like protein 3; Muscleblind like X linked protein; Protein HCHCR; MBNL3_HUMAN.
小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞
兔輸卵管平滑肌細胞
K7M2WT (K7M2-wt)小鼠骨肉瘤成骨細胞
HSF(SV40)人真皮成纖維細胞(原代細胞永生化)
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。