
培養(yǎng)方法與步驟:
①動(dòng)物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
冠狀動(dòng)脈
生長(zhǎng)特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
分類
小鼠原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1780
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自冠狀動(dòng)脈組織;冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈,起于主動(dòng)脈根部,分左右兩支,行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則,將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型:右優(yōu)勢(shì)型、均衡型、左優(yōu)勢(shì)型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干,發(fā)自左主動(dòng)脈竇,經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間,沿冠狀溝向左前方行后,立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行,旋支繞過(guò)心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。它是構(gòu)成冠狀動(dòng)脈壁的主要細(xì)胞成分,細(xì)胞膜上分布著多種離子通道,如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道;它們參與了靜息電位的維持與細(xì)胞膜電位的復(fù)極化、超極化,調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能,此外動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、炎癥及凋亡等。因此,原代分離培養(yǎng)的冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,對(duì)研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機(jī)制具有非常重要的作用。冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠核受體亞家族1D組成員2(NR1D2)elisa檢測(cè)試劑盒
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒 500T
小鼠過(guò)敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)elisa檢測(cè)試劑盒
微量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 50次
石蠟切片結(jié)締組織(CONNECTIVE TISSUE)摩羅利 (mallory)染色試劑盒
小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠激活素A(ACVA)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞PDGFRβ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
人膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體 Prokineticin 1
凝溶膠蛋白抗體 Gelsolin
FOXJ2蛋白抗體 FOXJ2
GTP結(jié)合蛋白SAR1B抗體 SAR1B
胰島素促進(jìn)因子重組兔單克隆抗體 PDX1
乙?;M蛋白H3抗體 Histone H3 (acetyl K9)
多巴胺受體D1重組兔單克隆抗體 DRD1
法尼基轉(zhuǎn)移酶β-亞單位抗體 FNTB
突觸核膜蛋白2抗體 Nesprin 2
微管蛋白β輔助因子D抗體 Beta tubulin cofactor D
RSPH3蛋白抗體 RSPH3
SH3BGRL2蛋白抗體 SH3BGRL2
8號(hào)染色體開放閱讀框74抗體 C8orf74
AF594標(biāo)記的單體櫻桃紅熒光蛋白標(biāo)簽抗體 mCherry, Alexa Fluor 594 conjugated
鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體 KCNQ1
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體 CCDC114
冰凍切片組織P35蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
小鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大鼠整合素α2(ITGA2)elisa檢測(cè)試劑盒
通用型副傷A(Salmonella Paratyphi A)定性基因檢測(cè)試劑盒
59 kDa; A 116A10.1; Amyloid beta precursor protein binding protein 1 59kD; Amyloid beta precursor protein binding protein 1 59kDa; Amyloid beta precursor protein binding protein 1; Amyloid beta precursor protein-binding protein 1; Amyloid protein binding protein 1; Amyloid protein-binding protein 1; APP BP1; APP-BP1; APPBP 1; HPP 1; HPP1; NAE 1; NAE1; NEDD8 activating enzyme E1 regulatory subunit; NEDD8 activating enzyme E1 subunit 1; NEDD8 activating enzyme E1 subunit; NEDD8-activating enzyme E1 regulatory subunit; Proto oncogene protein 1; Proto-oncogene protein 1; Protooncogene protein 1; ula 1; ULA1_HUMAN.
小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞
兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
LLC小鼠肺癌細(xì)胞
HT-29 (HT29)人結(jié)腸癌細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無(wú)菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。