
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞,這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠腮腺細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
腮腺組織
生長特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
梭形、多角形
分類
小鼠原代細(xì)胞
貨號
A01X1866
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡介:
小鼠腮腺細(xì)胞分離自腮腺組織;腮腺是哺乳類動物口腔中位于下頜角處的大唾液腺,位于外耳道的前下方,下頜后窩內(nèi)及下頜支的深面。腮腺也是某些無尾目動物頸部有毒皮膚腺的聚集體;唾液腺有3對,腮腺、舌下腺和頜下腺,其中大的一對是腮腺。腮腺細(xì)胞是高度分化的上皮源性細(xì)胞,是一種營養(yǎng)需要復(fù)雜、在一般合成培養(yǎng)基中不易生長,體外培養(yǎng)比較困難。目前,DMEM培養(yǎng)液被認(rèn)為較適于腺細(xì)胞的培養(yǎng)。加入一定量的血清更有利于細(xì)胞的生長、增殖與分化。另外,接種的細(xì)胞密度也是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素之一,尤其是在腺細(xì)胞這種單層細(xì)胞培養(yǎng)時,接種的細(xì)胞總數(shù)量和生長基質(zhì)表面的細(xì)胞密度對整個細(xì)胞的生長均有影響。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠腮腺細(xì)胞采用膠原酶-胰蛋白酶聯(lián)合消化后差速貼壁,結(jié)合上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠腮腺細(xì)胞經(jīng)PCK熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
MouseGastrinELISAKit
大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)elisa分析檢測試劑盒
FASL ELISA Kit
山羊丙二醛(MDA)elisa分析檢測試劑盒
MDAELISAKit
小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP3)elisa檢測試劑盒
大鼠前列腺素D2(PGD2)elisa檢測試劑盒
明膠瓊脂平板
兔過氧化物酶體增殖物激活受體β(PPARβ)elisa檢測試劑盒
γ氨基丁酸(GABA)elisa分析檢測試劑盒
GABA ELISA Kit
人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)elisa分析檢測試劑盒
PDIA3ELISAKit
蛋白表位標(biāo)記技術(shù)試劑盒
小鼠草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAT)elisa檢測試劑盒
鴿子胃動素(MTL)elisa分析檢測試劑盒
比色法定量檢測試劑盒
MXI1蛋白抗體
MXI1
2號染色體開放閱讀框68抗體
C2orf68
味覺受體蛋白家族2亞基16抗體 Anti-TAS2R16
磷酸化減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體 Anti-phospho-REC8(Ser251)
核因子κB抑制蛋白α抗體 Anti-NFKBIA/IKB alpha
細(xì)胞S期激酶相關(guān)蛋白2抗體 Anti-SKP2/skp2 p45
PE標(biāo)記的兔抗小鼠IgG H&L-Fc
小鼠腮腺細(xì)胞Rabbit Anti-Mouse IgG Fc / PE
磷酸核糖焦磷酸合成酶相關(guān)蛋白1抗體
HIV1 gp41; HIV-1 gp41; HIV1gp41; HIVgp41; Transmembrane protein gp41; Glycoprotein 41; Human Immunodeficiency Virus 1; HIV1 ENV (gp160); HIV1 gp160; HIV1gp160; HIV-1 gp160; env; Env polyprotein; Envelope glycoprotein gp160; Glycoprotein 41; gp41; HIV1; HIV1 clade a; HIV1/Clade A; SU; Surface protein; Human Immunodeficiency Virus Type 1 TM; Transmembrane protein; ENV_HV1MV.
小鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞
兔臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞
TM4正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞
JF-305人胰腺癌細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。