實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
小鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞分離自腎動脈組織；腎動脈的分支為葉間動脈，穿行于腎柱內(nèi)，上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處，形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發(fā)出，并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動脈，進(jìn)入腎小囊后形成球形的網(wǎng)，再匯集成出球小動脈，出腎小體。直小動脈分支形成網(wǎng)，再匯合成直小靜脈，入弓狀靜脈、葉間靜脈，后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎，注入下腔靜脈。腎動脈既是腎的營養(yǎng)血管，又是腎的機(jī)能血管，與腎泌尿機(jī)能密切相關(guān)。腎動脈在腎實質(zhì)內(nèi)形成兩個網(wǎng)：腎小球網(wǎng)，血壓較高，利于血漿濾過形成原尿；球后網(wǎng)，血壓較低，利于腎小管的重吸收。腎動脈平滑肌細(xì)胞是腎動脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。腎動脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎動脈組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1796 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人單純皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
雌二醇(E2)elisa分析檢測試劑盒
石蠟切片組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試劑盒（含HRP二抗）
小鼠大內(nèi)皮素(Big ET)elisa分析檢測試劑盒
大鼠I型前膠原羧基端肽（PICP）elisa檢測試劑盒
羊胰島素樣生長因子II(IGF2)elisa檢測試劑盒
大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
細(xì)胞HPV6（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-6）病毒定性檢測試劑盒
豚鼠白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測試劑盒
1號染色體開放閱讀框189抗體 C1orf189
2號染色體開放閱讀框42抗體 C2orf42
肌動蛋白結(jié)合蛋白LIM3抗體 ABLIM3
雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病毒）抗體 Newcastle disease virus
PE標(biāo)記小鼠CD45.2單克隆抗體 mouse CD45.2/PE
Rabbit Anti-Acetyl-Histone H4 (Lys8) antibody
雙特異性磷酸酶抗體28抗體 DUSP28
絲氨酸蛋白酶8抗體 PRSS8
F-box蛋白相關(guān)蛋白11抗體 FBXO11
FITC標(biāo)記人CD79b單克隆抗體 human CD79b/FITC
磷酸肌醇磷酸酶蛋白INPP5G抗體 Synaptojanin
卵泡刺結(jié)合蛋白2抗體 FNIP2
蛋白磷酸酶1調(diào)節(jié)亞單位18抗體 Phostensin
電壓門控鉀通道Kv4.1抗體 KCND1
鋅指蛋白ZZEF1抗體 ZZEF1
血管**素-1抗體 Angiopoietin-1
高效CHIP DNA分子庫構(gòu)建試劑盒
小鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞小鼠CD19分子(CD19)elisa分析檢測試劑盒
大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)elisa檢測試劑盒
SPINLW1; WAP7; WFDC7; Variant; Cancer/testis antigen 71; CT71; Epididymal protease inhibitor; Protease inhibitor WAP7; Serine protease inhibitor-like with Kunitz and WAP domains 1; EPPI_MOUSE; WAPfour-disulfide core domain protein 7.
小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞
兔皮下微血管內(nèi)皮細(xì)胞
9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞
K1(GLAG-66)人甲狀腺癌細(xì)胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。