實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
小鼠腎小球系膜細胞分離自腎小球組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾**原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球袢之間的一種特殊間充質，由系膜細胞和系膜基質組成。腎小球系膜細胞是腎小球內非?；钴S的細胞，具有分泌細胞基質、產(chǎn)生細胞因子、吞噬和大分子物質及類似平滑肌細胞收縮的功能。腎小球系膜細胞增生和基質的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細胞的培養(yǎng)是研究系膜擴張、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細胞的調節(jié)，以影響袢的內壓和濾過率；②支持作用，它填充于袢之間，支持的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內的大分子物質和蛋白質；④分泌腎素，在腎缺血或復合物沉積時，系膜細胞增生且分泌腎素。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1834 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠腎小球系膜細胞采用機械研磨法結合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠腎小球系膜細胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)elisa檢測試劑盒
大鼠CCAAT增強子結合蛋白α(C/EBPα)elisa檢測試劑盒
小鼠可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)elisa檢測試劑盒
犬表面活性蛋白D(SP-D)elisa分析檢測試劑盒
細胞醛縮酶（ADOLASE）活性比色法定量檢測試劑盒
魚CD8分子(CD8)elisa分析檢測試劑盒
大鼠神經(jīng)突蛋白1(NRN1)elisa檢測試劑盒
體液人體腺病毒（adenovirus）定性檢測試劑盒
豚鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)elisa檢測試劑盒
羥類固醇脫氫酶17β2抗體 HSD17B2
去整合素樣金屬蛋白酶9抗體 ADAM9
G蛋白偶聯(lián)受體RTA蛋白抗體 GPCR RTA/MRGPRF
HRAS樣抑制因子3抗體 Hrasls3
原鈣粘蛋白β3抗體 PCDHB3
粘蛋白15抗體 MUC15
分泌球蛋白樣蛋白抗體 SCGBL
富含亮氨酸重復序列蛋白1抗體 Lano/LRRC1
細胞分裂相關蛋白CSTF64抗體 CstF-64
細胞內流鉀通道蛋白Kir4.1抗體 Kir4.1
TOMM20L蛋白抗體 TOMM20L
V組和跨膜結構域蛋白5抗體 VSTM5
AF750標記的腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 BDNF, Alexa Fluor 750 conjugated
APC標記人CD206(MRC1)單克隆抗體 human CD206 (MRC1)/APC
巨噬細胞炎癥蛋白2（ GRO β）抗體 CXCL2
酪蛋白激酶δ1抗體 CSNK1D
線粒體復合物II蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒
小鼠腎小球系膜細胞紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）測試盒
10% SDS分子生物級溶液
GABA transport protein; GAT 2; GAT-2; GAT2; Solute carrier family 6 (Neurotransmitter transporter, GABA), member 13; S6A13_HUMAN.
小鼠食管成纖維細胞
兔膀胱平滑肌細胞
BRL大鼠肝細胞
K7M2WT (K7M2-wt)小鼠骨肉瘤成骨細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。