
實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料,由于細胞間結合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。其中,機械分散法的特點是簡便、快速,但對組織機械損傷大,而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊(或糊狀),應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動,使團塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時再采用機械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。
細胞簡介:

腎是脊椎動物的一種器官,屬于泌尿系統(tǒng)的一部分,負責過濾血液中的雜質、維持體液和電解質的平衡,后產(chǎn)生尿液經(jīng)尿道排出體外;同時也具備的功能以調(diào)節(jié)血壓。
周細胞是一種包圍全身和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞,可以收縮。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜,基膜上有多種細胞連接,包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合。
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
腎組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1598 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性:
1) 組織來源于實驗動物的正常腎組織。
2) 細胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細胞生長方式:長梭形細胞,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf 原代周 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品:
COX-2ELISAKit
猴皮質醇(COR)elisa分析檢測試劑盒
COR ELISA kit
人防御素 elisa分析檢測試劑盒
HumandefensinsELISAKit
SRPX2蛋白抗體 Anti-SRPX2
復制激活因子C1抗體 Anti-RFC1
蛋白激酶C結合蛋白NELL1抗體 Anti-NELL1
磷酸化原癌基因蛋白激酶Yes1抗體 Anti-phospho-YES1(Tyr426)
白介素31受體a抗體
IL31RA
1號染色體開放閱讀框195抗體
C1orf195
通用型細胞周期流式細胞分析試劑盒
大鼠組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)elisa檢測試劑盒
乳果糖待測樣品處理試劑盒
小鼠白介素31(IL-31)elisa分析檢測試劑盒
蛋白質磷酸酶1G抗體
PPM1G
肽酰tRNA水解酶ICT1抗體
ICT1
UL16結合蛋白3抗體 Anti-ULBP3/N2DL3
丙酮酸激酶-M2抗體 Anti-PKM2
磷酸二酯酶7抗體 Anti-PDE7A
磷酸化信號細胞活化分子CD150抗體 Anti-phospho-SLAMF1(Tyr281)
PE-Cy5.5標記的羊抗牛IgG H&L
大鼠腎周細胞小鼠噬酸性細胞趨化因子(Eotaxin)elisa檢測試劑盒
人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)elisa分析檢測試劑盒
FKH10; FKHL10; Forkhead (Drosophila) like 10; Forkhead box I1; Forkhead box protein I1; Forkhead like 10; Forkhead related activator 6; Forkhead related transcription factor 6; Forkhead-related protein FKHL10; FREAC 6; FREAC6; Hepatocyte nuclear factor 3 forkhead homolog 3; HFH 3; HFH3; HNF 3/fork head homolog 3; HNF-3 fork-head homolog 3; Human HNF-3 fork-head homolog-3 HFH-3 mRNA complete cds; MGC34197; FOXI1_HUMAN.
大鼠腎周細胞
人直腸上皮細胞
LS1034人結腸腺癌細胞
MDST8人結腸癌細胞
實驗具體步驟:

(1)動物福利:小鼠麻醉犧牲/處死,或者斷頸處死;
(2)小鼠:可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次,或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min,然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈;
(3)取出心臟組織:用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔,取出心臟組織,置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中;
(4)組織:在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二,充分洗滌里邊的血液,/3次,每次5min;
(5)破碎組織:使用眼科鉗或者剪刀,將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊;(備注:如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min,
利于后期細胞從組織塊中爬出來,同時能夠消除部分結締組織等)
(6)種植組織塊:將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次,每次5min,然后使用完全培養(yǎng)基(含有1X雙抗)洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后,可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中(備注:破碎組織塊可能還含有液體,可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下,把液體);種植完成后,可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時,然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜(也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜);

(7)培養(yǎng)基培養(yǎng):將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基,然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱(37℃,5% CO2)培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況,一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率;
(8)貼壁細胞傳代:當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍,進行傳代,此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞,消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可,當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況,一旦達到消化完成(皺縮細胞≥70%)即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候,一定要輕柔/緩慢,不能吹打到組織塊,如果組織塊掉下來,大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中;
(9)鑒定:細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定,鑒定辦法包括:RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。