產(chǎn)品名稱
兔耳軟骨細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
耳組織
生長(zhǎng)特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
梭狀
分類
兔原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X2165
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性：
1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耳組織。
2)細(xì)胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：梭狀，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
彈性軟骨僅存在高等動(dòng)物外耳廓、聽(tīng)道、會(huì)咽等處。與其它軟骨相比，間質(zhì)中含有大量交織成網(wǎng)的彈性纖維，成網(wǎng)狀在軟骨內(nèi)排列，同時(shí)含有少量膠原纖維。目前，彈性軟骨大多被用于修復(fù)人類殘缺及畸形耳廓及其它美容修復(fù)。
①動(dòng)物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開(kāi)背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開(kāi)腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí)，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁，并開(kāi)始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可見(jiàn)培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色，此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞，這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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線粒體脫偶連蛋白3抗體 Anti-UCP-3
Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG H&L
兔耳軟骨細(xì)胞Rabbit Anti-Pig IgG H&L / Cy7
磷酸化絲裂原活化的蛋白激酶p38β抗體
alpha CaMKII; CaMKII alpha; Calcium / Calmodulin Dependent Protein Kinase II G; Calcium calmodulin dependent protein kinase CaM kinase II alpha; Calcium calmodulin dependent protein kinase II alpha-B subunit; Calcium calmodulin dependent protein kinase II; Calcium/calmodulin dependent protein kinase II alpha; Calcium/calmodulin-dependent protein kinase (CaM kinase) II alpha; Calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha; Calcium/calmodulin-dependent protein kinase II-alpha; Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit alpha; Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type IIA; CaM kinase II alpha chain; CaM kinase II alpha subunit; CaM kinase II subunit alpha; CAM2; CaMK II alpha subunit; CaMK-II subunit alpha; CAMK2A; CAMKA; CAMKB; CaMKII; CaMK 2a; CaMK2a; KCC2A_HUMAN.
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