培養(yǎng)方法與步驟：
①動(dòng)物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時(shí)間不能過長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí)，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁，并開始生長(zhǎng)。如果無污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞，這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
兔膈肌細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
膈肌組織
生長(zhǎng)特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
長(zhǎng)梭狀細(xì)胞
分類
兔原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X2159
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常膈肌組織。
2）細(xì)胞鑒定：肌動(dòng)蛋白（α-actin）熒光染色為陽性。
3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
膈肌是位于胸腔與腹腔之間的肌肉纖維組織，其周圍為肌腹，中央為腱膜，是機(jī)體重要的呼吸肌。
組織學(xué)上，膈肌屬骨骼肌，成熟的骨骼肌纖維不具有增殖能力。骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞是骨骼肌與肌膜之間的一種體積較小的細(xì)胞，排列在肌纖維的表面，當(dāng)肌纖維損傷后，可分化為肌纖維修復(fù)損傷。隨著組織發(fā)育的成熟，肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)量相對(duì)減少。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒
RAB3-GTP酶激活蛋白催化亞單位1抗體
RAB3GAP1
神經(jīng)長(zhǎng)卷曲螺旋蛋白2抗體
JAKMIP3
泛素化組蛋白H2AX抗體 Anti-Histone H2A.X (Ubiquityl Lys119)
泛酸激酶3抗體 Anti-PANK3
血小板白細(xì)胞C激酶底物源結(jié)構(gòu)域M2抗體 Anti-PLEKHM2/SKIP
磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白SCG10抗體 Anti-phospho-STMN2/SCG10 (Ser50)
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG H&L
兔膈肌細(xì)胞Mouse Anti-Guinea Pig IgG H&L / PE-Cy7
突觸糖蛋白2抗體
D-fructose-6-phosphate amidotransferase 1; GFA; GFAT 1; GFAT; GFAT1; GFAT1m; GFPT; Gfpt1; GFPT1_HUMAN; Glucosamine--fructose-6-phosphate aminotransferase [isomerizing] 1; Glutamine--fructose-6-phosphate transaminase 1; Glutamine:fructose 6 phosphate amidotransferase 1; Hexosephosphate aminotransferase 1.
兔膈肌細(xì)胞
人膽囊微血管內(nèi)皮細(xì)胞
A129L人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
RWPE-2 人前列腺正常細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。