實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
腎小球為血液過濾器，腎小球壁構(gòu)成過濾膜。腎小球過濾膜從內(nèi)到外有三層結(jié)構(gòu)：內(nèi)層為內(nèi)皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細胞層，上皮細胞又稱足細胞，其不規(guī)則突起稱足突，其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾膜過濾后，濾液入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質(zhì)不能濾過而保留于血液中，僅小分子物質(zhì)如尿素、葡萄糖、電解質(zhì)及某些小分子蛋白能濾過。
腎足細胞即腎小球上皮細胞，它附著于腎小球基底膜的外側(cè)，連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞，體外培養(yǎng)的原代細???
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎臟組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2082 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于實驗動物正常腎臟組織。
2)細胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或WT-1（Wilm'sTumorProtein）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：不規(guī)則，含足突細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 腎足 細 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
NRG4ELISAkit
大鼠白血病抑制因子(LIF)elisa分析檢測試劑盒
LIF ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)elisa分析檢測試劑盒
HumanTIMP-2ELISAKit
純化溶酶體酸性磷酸酶活性比色法定量檢測試劑盒
人Toll樣受體5(TLR5)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素10(IL-10)elisa檢測試劑盒
小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體 elisa分析檢測試劑盒
魚(NE)elisa分析檢測試劑盒
NE ELISA kit
人層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)elisa分析檢測試劑盒
HumanLAMC2ELISAKit
土壤酸性木聚糖酶測試盒/土壤酸性半纖維素酶測試盒
通用型青枯菌/茄科雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum；Rs）
通用型組織/細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
大鼠組胺H3受體(HRH3)elisa檢測試劑盒
伴肌動蛋白抗體
Nebulin
Gastrokine 2蛋白抗體
Gastrokine 2
脫中胚蛋白抗體 Anti-TBR2/Eomes
磷酸化p21激活激酶3抗體 Anti-phospho-PAK3(Ser139)
八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6抗體 Anti-OCT6
Snail蛋白抗體 Anti-Snail/SNAI 1
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗人IgM
兔腎足細胞Goat Anti-Mouse IgM / FITC
FGFR1癌基因伴侶蛋白2抗體
Bone morphogenetic protein 2; BMP 2; BMP 2A; BMP2A; BMP-2; BMP2_HUMAN.
兔腎足細胞
大鼠牙齦上皮細胞
小鼠胚胎成纖維細胞；Balb/3T3 （種屬鑒定）
SW620+GFP人結(jié)直腸腺癌細胞+GFP
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。