實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
纖維環(huán)，位于椎間盤的周緣部，由纖維軟骨組成，纖維環(huán)的纖維在椎體間斜行，在橫切面上排列成同心環(huán)狀，相鄰環(huán)的纖維具有相反的斜度，而相互交叉。纖維環(huán)細(xì)胞位于膠原纖維束之前，合成和分泌纖維環(huán)細(xì)胞外基質(zhì)，維持正常的纖維環(huán)結(jié)構(gòu)和功能。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
|
椎間盤組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2144 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常椎間盤組織。
2)細(xì)胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)或Ⅰ型膠原(Collagen Ⅰ)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：多角形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 軟骨 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人白介素1受體相關(guān)激酶-4(IRAK-4)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
脂肪瘤高遷移率融合蛋白樣蛋白3抗體
LHFPL3
胸腺基質(zhì)細(xì)胞**素受體抗體
CRLF2
全組織神經(jīng)元高爾基法（GOLGI）染色試劑盒
人γ分泌酶elisa檢測試劑盒
大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)elisa檢測試劑盒
小鼠無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3A(WNT3A)elisa檢測試劑盒
RNA結(jié)合蛋白NOB1抗體
NOB1
生長抗體
Growth Hormone
乳腺癌抗雌抵抗蛋白2抗體 Anti-TReP132/RAPA
磷酸化6磷酸果糖激酶2抗體 Anti-Phospho-PFK2 (Ser467)
磷酸化磷脂酰肌醇激酶PIK3-γ抗體 Anti-phospho-PIK3 gamma (Ser1101)
信號肽肽酶SPP抗體 Anti-SPP/Signal Peptide Peptidase
T細(xì)胞激活蛋白6E抗體
LY6E/Stem cell anti 2
嗅覺受體5AP2抗體
OR5AP2
信號通路Wnt2B抗體 Anti-WNT2B
NIFK蛋白抗體 Anti-NIFK
環(huán)指蛋白180抗體 Anti-RNF180
肺表面活性蛋白B抗體 Anti-SP-B
大鼠β細(xì)胞素(BTC)elisa分析檢測試劑盒
兔纖維環(huán)細(xì)胞Rat Substance P ELISA Kit
人骨涎蛋白(BSP)elisa分析檢測試劑盒
Divergent upstream protein; DNA mismatch repair protein; DNA mismatch repair protein Msh 3; DNA mismatch repair protein Msh3; DUC 1; DUC1; DUG; DUP; hMSH3; MGC163306; MGC163308; Mismatch repair protein 1; MRP 1; MRP1; MSH 3; MSH3; MSH3_HUMAN; MutS homolog 3 (E. coli); MutS homolog 3.
兔纖維環(huán)細(xì)胞
大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠黑色素瘤細(xì)胞；B16B
Tca8113(舌癌細(xì)胞)
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。