實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
血管發(fā)生和發(fā)展的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞（ smooth muscle cells, SMCs）轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌細胞能表達鈣離子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達可能是造成血管壁炎癥反應(yīng)，并進一步造成血管的原因 。因此，對血管平滑肌細胞的體外培養(yǎng)和研究可用來發(fā)現(xiàn)和確定新的血管的靶向方法。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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胸主動脈組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2044 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常胸主動脈組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形、不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代平滑肌細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶測試盒
藍藻果聚糖化學(xué)法比色法定量檢測試劑盒
總膽固醇TCH酶法測試盒液體 100ml 手工/半自動
大鼠雙氫睪酮（DHT）elisa檢測試劑盒
純化線粒體蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒
組織MAPKAP KINASE3激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人半乳糖(Galactose)elisa分析檢測試劑盒
大鼠成纖維細胞生長因子10(FGF10)elisa檢測試劑盒
小鼠胰島素受體底物2(IRS2)elisa檢測試劑盒
四分子交聯(lián)體4/四旋蛋白4/四次跨膜蛋白4抗體 TSPAN4
糖蛋白VI/六糖蛋白抗體 Glycoprotein VI
PRAM1蛋白抗體 PRAM1
RASL10B蛋白抗體 RASL10B
2’,3’-環(huán)腺苷酸-3’-磷酸二酯酶重組鼠單克隆抗體 CNPase
3號染色體開放閱讀框37抗體 C3orf37
肌球蛋白1F抗體 MYO1F
畸胎瘤衍化生長因子抗體(N端) CRIPTO
血管內(nèi)皮生長因子受體1重組兔單克隆抗體 VEGFR1
巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2抗體 FUT2
蛋白酶體激活因子PA28γ抗體 PSME3
凋亡相關(guān)蛋白2抗體 PDCD2
FC段IgE受體α多肽/Fc ε RIα抗體 Fc ε RIα/Fc epsilon RI
FITC標(biāo)記小鼠CD49d單克隆抗體 mouse CD49d/FITC
磷脂酰肌醇激酶（PI3Kβ）重組兔單克隆抗體 PI3-kinase p110 subunit beta
膜相關(guān)磷脂轉(zhuǎn)運蛋白抗體 NIR1
魚溶菌酶(腎淀粉樣變)(LZM)elisa分析檢測試劑盒
兔胸主動脈平滑肌細胞Mouse Anti-Rabbit IgG H&L / FITC
范可尼貧血相關(guān)蛋白M抗體
RHOA_HUMAN; RhoA protein; Aplysia ras related homolog 12; ARH 12; ARH12; ARHA; H 12; Oncogene RHO H12; Ras homolog gene family member A; RHO 12; Rho A; RHO H12; RHO12; RHOH 12; RHOH12; Small GTP binding protein Rho A; Small GTP binding protein RhoA; Transforming protein Rho A; Transforming protein RhoA.
兔胸主動脈平滑肌細胞
大鼠小腸成纖維細胞
RM-1+LUC小鼠前列腺癌細胞熒光素酶標(biāo)記
TOV-112D人上皮性卵巢癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。