實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
主動(dòng)脈瓣施半月瓣，位于左心室和主動(dòng)脈之間，抑制射入主動(dòng)脈的血液回流入左心室。主動(dòng)脈瓣鈣化可引起主動(dòng)脈瓣狹窄關(guān)閉不全等，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動(dòng)脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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主動(dòng)脈組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2040 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常主動(dòng)脈組織。
2）細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。
3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形、不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 間質(zhì) 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
石蠟切片組織組蛋白NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
電轉(zhuǎn)試劑盒
蛋白提取試劑盒（2D電泳用）50T
大鼠磷酸化Tau蛋白(pMAPT/pTAU)elisa檢測(cè)試劑盒
/酵母細(xì)胞線粒體粗提分離試劑盒
細(xì)胞MAPKAP KINASE3激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
人補(bǔ)體蛋白5(C5)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠胰島衍生蛋白1β(REG1β)elisa檢測(cè)試劑盒
衰老關(guān)鍵蛋白抗體 Fibulin 5
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SRPK1抗體 SRPK1
PE-Cy5標(biāo)記小鼠CD40單克隆抗體 mouse CD40/PE-Cy5
PE標(biāo)記人CD25單克隆抗體 human CD25/PE
組蛋白去乙酰化酶6抗體 HDAC6
17β羥類固醇脫氫酶14/17β-HSD14抗體 HSD17B14
紅細(xì)胞胞漿蛋白Reptin抗體 Reptin/TIP49B/RUVB2
環(huán)指蛋白6抗體 RNF6
鋅指蛋白92抗體 ZFP92
雄結(jié)合蛋白抗體 SHBG
促甲狀腺釋放受體抗體 TRH Receptor
蛋氨酸亞砜還原酶MSRA抗體 Methionine Sulfoxide Reductase A
ENO4蛋白抗體 ENO4
FAM19A1蛋白抗體 TAFA1
磷酸化糖原合酶激酶-3β單克隆抗體 phospho-GSK-3 Beta (Ser9)
磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移酶A抗體 PCYT1A
小鼠誘導(dǎo)型一氧化合成酶(iNOS)elisa檢測(cè)試劑盒
兔主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞人TH糖蛋白(THP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠白介素11(IL-11)elisa檢測(cè)試劑盒
CAAX farnesyltransferase alpha subunit; Farnesyl protein transferase alpha subunit; Farnesyltransferase CAAX box alpha; Farnesyltransferase, CAAX box, alpha; FPTA; FTase alpha; GGTase I alpha; PGGT1A; Protein farnesyltransferase/geranylgeranyltransferase type I alpha subunit; Protein prenyltransferase alpha subunit repeat containing 2; PTAR2; Ras proteins prenyltransferase alpha; Ras proteins prenyltransferase subunit alpha; Type I protein geranyl geranyltransferase alpha subunit; FNTA_HUMAN.
兔主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞
大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞
大鼠
U251 MG (KO)人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。