實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
樹突狀細(xì)胞（ Dendritic cells, DC）是機(jī)體功能強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞，它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
DC的來源有兩條途徑：
①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC，稱為髓樣DC，也稱DCl，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；包括朗格漢斯細(xì)胞，間皮（或真皮）DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等。
②來源于樣干細(xì)胞，稱為樣DC或漿細(xì)胞樣DC，即DC2，與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)???
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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外周血組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1931 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常外周血組織。
2)細(xì)胞鑒定：CD11c熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：不規(guī)則細(xì)胞，半貼壁半懸浮培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代 樹突狀（ DC） 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠甘氨酸脫氫酶(GLDC)elisa檢測(cè)試劑盒
糖原磷酸化酶b（GPb）試劑盒
通用型總淀粉生物酶比色法定量檢測(cè)試劑盒
組織及血液堿性磷酸酶（AKP/ALP）測(cè)試盒
大鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞半胱-7（CASPASE-7）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
人雌二醇(E2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員10A(TNFRSF10A)elisa檢測(cè)試劑盒
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 GLUT5
驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員25抗體 KIF25
G蛋白偶聯(lián)受體66/神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體1抗體 NMUR1/GPR66
HER2受體抗體 HER2 receptor
有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體 INSC
載脂蛋白J（APOJ）抗體 Clusterin
紡錘體極點(diǎn)構(gòu)成蛋白25抗體 SPC25
富含精氨酸/絲氨酸剪切因子2B抗體 SFRS2B
硒酶抗體 SCLY
細(xì)胞角蛋白19抗體 Cytokeratin 19
TATA盒結(jié)合蛋白相關(guān)因子TAF1B抗體 TAF1B
T細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體 VSIG4
AF750標(biāo)記的CD19抗體 CD19, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy5.5標(biāo)記小鼠CD8a單克隆抗體 mouse CD8a/APC-Cy5.5
精子頂體前體蛋白抗體 Acrosin
跨膜絲氨酸蛋白酶13抗體 TMPRSS13
大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠DC細(xì)胞Goat Anti-Chicken IgY
鋅指蛋白678抗體
Dact1 / Dapper homolog 1; Dact; Dact1; DACT1_HUMAN; Dapper antagonist of beta catenin homolog 1; Dapper antagonist of catenin 1; Dapper antibodyDapper homolog 1; DAPPER1; Dpr antibodyDpr1; Frd; Frodo; hDPR1; Hepatocellular carcinoma novel gene 3 protein; Heptacellular carcinoma novel gene 3; HNG3; MTNG3; Thyex3.
小鼠DC細(xì)胞
大鼠輸尿管成纖維細(xì)胞
H9c2(2-1)（大鼠心肌細(xì)胞）
U87MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。