產(chǎn)品名稱
小鼠鼻腔粘膜上皮細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
鼻腔粘膜組織
生長特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
鋪路石狀細(xì)胞
分類
小鼠原代細(xì)胞
貨號
A01X1993
用途
僅供科研實驗
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常鼻腔粘膜組織。
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或細(xì)胞角蛋白-19（CK-19）熒光染色為陽性。經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
4)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡介：
鼻腔粘膜是覆蓋在動物體內(nèi)呼吸器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。鼻腔粘膜覆蓋于鼻腔表面，粘膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。
上皮的垂直切面上，細(xì)胞形狀不一。緊靠基膜的一層基底細(xì)胞為矮柱狀，為具有增殖分化能力的干細(xì)胞，部分子細(xì)胞向淺層移動?；讓右陨鲜菙?shù)層多邊形細(xì)胞，再上為幾層梭形或扁平細(xì)胞。僅靠近表面幾層細(xì)胞為扁平狀，基底層細(xì)胞能不斷分裂增生，以補(bǔ)充表層衰老或損傷脫落的細(xì)胞。復(fù)層扁平上皮深層的結(jié)締組織內(nèi)有豐富的，有利于復(fù)層扁平上皮的營養(yǎng)。
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞，這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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小鼠鼻腔粘膜上皮細(xì)胞
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