實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
巨噬細(xì)胞源自單核細(xì)胞，屬于細(xì)胞，有多種功能，屬不繁殖細(xì)胞群，難以長期培養(yǎng)。
巨噬細(xì)胞在吞噬和異物和衰老死亡細(xì)胞、分泌生物活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)血細(xì)胞**與參與應(yīng)答等方面發(fā)揮著廣泛的生物學(xué)作用，是一類在體內(nèi)發(fā)揮重要效應(yīng)的細(xì)胞，為體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)維持和組織防御提供保障。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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骨髓組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1941 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常骨髓組織。
2) 細(xì)胞鑒定：CD68或MAC387熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長方式：圓形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf 原代巨噬 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)elisa檢測試劑盒
組蛋白賴氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶2B抗體
KMT2B
障礙自整合蛋白BAF重組兔單克隆抗體
BANF1
組織葡萄糖激酶（glucose kinase）比色法定量檢測試劑盒
人干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)elisa分析檢測試劑盒
大鼠胱抑素S(CST4)elisa檢測試劑盒
魚elisa分析檢測試劑盒
NECAP1蛋白抗體
NECAP1
6號染色體開放閱讀框58抗體
C6orf58
跨膜絲氨酸蛋白酶5抗體 Anti-TMPRSS5
磷酸化p21激活激酶2抗體 Anti-phospho-PAK2(Ser141)
泛素特異性蛋白酶OTB1抗體 Anti-OTUB1
14號染色體開放閱讀框174 Anti-SAMD15/C14orf174
相似腫瘤抑制基因HUGL抗體
LLGL2
DNAJA4蛋白抗體
DNAJA4
玻璃粘連蛋白抗體 Anti-VTN/Vitronectin
核受體輔助抑制因子1抗體 Anti-NCoR1
視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞特異性蛋白65抗體 Anti-RPE65
緊密連接蛋白2抗體 Anti-TJP2
大鼠白細(xì)胞抗原DR(HLA-DR)elisa分析檢測試劑盒
小鼠骨髓巨噬細(xì)胞Goat Anti-Rabbit IgG H&L / APC
鋅指蛋白399抗體
ACS3; B-HLH DNA binding protein; bHLHa38; BPES2; BPES3; Class A basic helix-loop-helix protein 38; CRS1; H-twist; OTTHUMP00000116043; SCS; Twist basic helix loop helix transcription factor 1; Twist homolog 1 (Drosophila); Twist homolog 1; TWIST homolog of drosophila; Twist related protein 1; Twist-related protein 1; Twist1; TWST1_HUMAN.
小鼠骨髓巨噬細(xì)胞
大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞
CAL 33人舌鱗狀細(xì)胞癌
大鼠肝癌細(xì)胞；H-4-Ⅱ-E
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。