實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
集合管是由皮質(zhì)走向髓質(zhì)椎體孔的小管，沿途有許多腎單位的遠(yuǎn)曲小管與之相連，管徑逐漸變粗，管壁逐漸變厚，管壁由柱狀上皮構(gòu)成。
集合管流的是小管液，腎臟血液經(jīng)腎小球濾過，形成的原尿，進(jìn)入腎小管后就稱為小管液，小管液流向集合管進(jìn)一步濾過和重吸收形成終尿。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎臟組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1847 |
僅供科研研究實驗 |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常腎臟組織。
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白-18（CK-18）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 上皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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GR-βELISAKit
大鼠促性腺釋放受體(GnRHR)elisa分析檢測試劑盒
GnRHR ELISA Kit
人膠轉(zhuǎn)蛋白(TAGLN)elisa分析檢測試劑盒
HumanTAGLNELISAKit
微管相關(guān)蛋白α6抗體 Anti-Tubulin alpha 6/TUBA1C
認(rèn)知缺陷突觸相關(guān)蛋白SynGAP抗體 Anti-RASA1/SynGAP
巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體 Anti-Nestin
血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體 Anti-VWF
睪酮(T)elisa分析檢測試劑盒
Elephant Testosterone(T)ELISA kit
人大腸癌專一抗原4(CCSA-4)elisa分析檢測試劑盒
CCSA-4ELISAkit
大鼠抗鏈球菌溶血素O抗體(IgG)elisa檢測試劑盒
細(xì)胞脂質(zhì)溶解比色法定量檢測試劑盒
雌二醇(E2)elisa分析檢測試劑盒
細(xì)胞總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒
NACA2蛋白抗體
NACA2
ZNF792/鋅指蛋白792抗體
FLJ38451
先心病相關(guān)蛋白TBX1抗體 Anti-TBX1/Brachyury
磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 Anti-Phospho-PLC gamma 2(Tyr753)
鋅指蛋白339抗體 Anti-OVOL2/ZNF339
炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白抗體 Anti-SELS
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgG H&L
小鼠腎集合管上皮細(xì)胞LN ELISA kit
人甲基化DNA[蛋白]半胱氨酸S甲基轉(zhuǎn)移酶elisa分析檢測試劑盒
20S Proteasome α2; HC3; Macropain subunit C3; MU antibody Multicatalytic endopeptidase complex subunit C3; PMSA2; Proteasome (prosome macropain) subunit alpha type 2; Proteasome alpha 2 subunit; Proteasome component C3; Proteasome subunit alpha type 2; Proteasome subunit alpha type-2; Proteasome subunit HC3; PSC2; PSC3; PSMA 2; psmA2; PSA2_HUMAN.
小鼠腎集合管上皮細(xì)胞
大鼠口腔黏膜上皮細(xì)胞
IM95m胃癌細(xì)胞
人甲狀腺癌細(xì)胞； HTh-7 (STR)
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。