實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
輸卵管是卵子運(yùn)輸、儲(chǔ)存、獲能，以及卵母細(xì)胞采取、運(yùn)送、成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的重要場(chǎng)所。輸卵管與其他空腔器官相似，其管壁由內(nèi)向外為粘膜層 (tunica mucosa)、肌層(muscular layer)和漿膜層所構(gòu)成。其中，肌層的結(jié)構(gòu)和厚度因不同節(jié)段而有差異，峽部肌層厚，管腔亦小。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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輸卵管組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1873 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常輸卵管組織。
2)細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代 平滑肌 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Mouseanti-mitochondrialADP/ATPcarrier(AAC)antibodyELISAkit
大鼠CD4分子(CD4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
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人高靈敏度促甲狀腺(U-TSH)elisa分析檢測(cè)試劑盒
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溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體 Anti-SLC44A1/CD92
乳腺癌和卵巢癌易感基因RAD51C抗體 Anti-RAD51C
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Nek3抗體 Anti-NEK3
鋅指蛋白23抗體 Anti-ZNF23
高遷移率核小體結(jié)合蛋白1
HMG14
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體
ANKRD32
蛋白酶抑制劑混合物片劑（EDTA Free）20片
鈣ATP酶PMCA蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒
小鼠白介素2(IL－2)elisa檢測(cè)試劑盒
豬維生素D(VD)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
原鈣粘附蛋白α4抗體
PCDHA4
缺氧誘導(dǎo)基因2蛋白抗體
HIG2
環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 Anti-TORC1/CRTC1
P-鈣粘附分子抗體 Anti-P-cadherin
RNA聚合酶1和轉(zhuǎn)錄釋放因子抗體 Anti-PTRF
多配體聚糖結(jié)合蛋白2抗體 Anti-Syntenin 2
PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG H&L
小鼠輸卵管平滑肌細(xì)胞Rabbit Anti-Pig IgG H&L whole serum
膠漿成熟因子γ/GMF-γ抗體
Caspase-8 subunit p18; ALPS2B; Amyotrophic lateral sclerosis 2 chromosomal region candidate gene 12 protein; Apoptosis related cysteine peptidase; Apoptotic cysteine protease; Apoptotic protease Mch 5; Apoptotic protease Mch-5; Apoptotic protease Mch5; CAP 4; CAP4; CASP 8; CASP-8; CASP8; CASP8_HUMAN; Caspase 8; Caspase 8 apoptosis related cysteine peptidase; Caspase-8 subunit p18; Caspase8; CED 3; FADD homologous ICE/CED 3 like protease; FADD Homologous ICE/CED3 Like Protease; FADD Like ICE; FADD-homologous ICE/CED-3-like protease; FADD-like ICE; FLICE; FLJ17672; ICE like apoptotic protease 5; ICE-like apoptotic protease 5; MACH alpha 1/2/3 protein; MACH; MACH beta 1/2/3/4 protein; MCH 5; MCH5; MGC78473; MORT1 associated CED 3 homolog; MORT1 associated CED3 homolog; MORT1-associated CED-3 homolog; OTTHUMP00000163717; OTTHUMP00000163720; OTTHUMP00000163724; OTTHUMP00000163725; OTTHUMP00000165062; OTTHUMP00000165063; OTTHUMP00000165064; OTTHUMP00000206552; OTTHUMP00000206582
小鼠輸卵管平滑肌細(xì)胞
大鼠結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞
KMS-11人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞
人晶體上皮細(xì)胞；SRA01/04
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。