實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
輸尿管位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，上起自腎盂，下終止于膀胱三角。輸尿管管壁分為 4層：黏膜表面、固有層、輸尿管肌層和外膜。其中，肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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輸尿管組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1838 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常輸尿管組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代 平滑肌 細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠總膽汁酸(TBA)elisa檢測試劑盒
大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)elisa檢測試劑盒
魚黃體**素(LH)elisa分析檢測試劑盒
人芳香烴受體(AhR)elisa檢測試劑盒免費代測
大量（文庫）酵母細胞完全轉(zhuǎn)化試劑盒
血液高效液相色譜法定量檢測試劑盒
瑞氏染色液（即用型）500ml
大鼠巨噬細胞炎性蛋白5(MIP5)elisa檢測試劑盒
PCR擴增檢測試劑盒
腎細胞癌抗原NYREN 45抗體 KCTD3
嗜酸乳桿菌假定蛋白 Lactobacillus acidophilus hypothetical protein
OPA1L蛋白抗體 OPA1L
PE-Cy5標記人CD107a單克隆抗體 human CD107b/PE-Cy5
轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MTA3抗體 MTA3
組蛋白賴氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶2B抗體 KMT2B
核酸內(nèi)切酶8樣蛋白2抗體 NEIL2
黑色素瘤相關(guān)抗原C1抗體 MAGEC1
鋅指蛋白516抗體 ZNF516
鋅指蛋白826抗體 ZNF826
層粘蛋白α1抗體 Laminin alpha 1
雌調(diào)節(jié)基因1抗體 CUZD1
DOCK9蛋白抗體 DOCK9
eIF4E結(jié)合蛋白抗體 eIF4EBP1
磷酸化蛋白激酶受體B1+B2抗體 phospho-EphB1+EphB2 (Tyr594)
磷酸化轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體 phospho-MYBL2 (Thr487)
酵母多酚氧化酶（polyphenol oxidase；PPO）活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠輸尿管平滑肌細胞Rabbit Anti-Monkey IgM / HRP
神經(jīng)叢蛋白A2抗體
Hypothetical protein LOC9907; KIAA0415; Uncharacterized protein KIAA0415; AP5Z1_HUMAN.
小鼠輸尿管平滑肌細胞
大鼠結(jié)腸成纖維細胞
KMS-34人多發(fā)性骨髓瘤細胞
人類甲狀腺未分化癌； 8305C (STR)
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。