實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損已被視為創(chuàng)傷、感染、休克、腫瘤、血管等多種和綜合癥發(fā)展的病理基礎(chǔ)。一旦微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，必然影響甚至破壞微血管內(nèi)皮細(xì)胞正常的生物學(xué)功能，引起多種的發(fā)生。
微血管內(nèi)皮細(xì)胞間連接與血管通透性有著非常密切的關(guān)系。微血管內(nèi)皮細(xì)胞合成與分泌前列環(huán)素、一氧化氮、內(nèi)皮源性超極化因子和內(nèi)皮素等物質(zhì)，來維持血管的正常狀態(tài)。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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脂肪組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1905 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常脂肪組織。
2)細(xì)胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代 內(nèi)皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT)測試盒
大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)elisa檢測試劑盒
豬1,25二羥基維生素D3(1,25 DHVD3)elisa分析檢測試劑盒
人黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)elisa分析檢測試劑盒
隱孢子蟲（Cryptosporidium）涂片吉姆莎（Giemsa）染色試劑盒
組織及血液酸性磷酸酶（ACP）測試盒
石蠟切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒
小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)elisa分析檢測試劑盒
5’核苷酸酶EC3.1.3.5 1 KU/瓶
抑制素βB/Inhibin β B抗體 Inhibin beta B
原鈣粘附蛋白α8抗體 PCDHA8
范可尼綜合征相關(guān)蛋白FAN1抗體 FAN1
輔酶生物合成單加氧酶COQ6抗體 COQ6
G蛋白偶聯(lián)受體135/松弛素受體3抗體 Relaxin 3 receptor 1
G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子7抗體 RGS7
內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN1抗體 Epsin 1
膀胱癌缺失基因1抗體 BRINP1
AF680標(biāo)記的神經(jīng)元核抗原抗體 NeuN, Alexa Flour 680 conjugated
AF750標(biāo)記的腫瘤壞死因子-α抗體 TNF alpha, Alexa Flour 750 conjugated
緊密連接蛋白3抗體 Claudin 3
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白129抗體 CCDC129
SRPX2蛋白抗體 SRPX2
TRIM45蛋白抗體 TRIM45
突觸相關(guān)蛋白23抗體 SNAP23
細(xì)胞表面球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體 LILRB1
細(xì)胞糖原磷酸化酶激酶（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE KINASE）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒
小鼠脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)elisa分析檢測試劑盒
大鼠載脂蛋白A1（Apo-A1）elisa檢測試劑盒
6-bisphosphatase 1; 6-bisphosphate 1-phosphohydrolase 1; D fructose 1 6 bisphosphate 1 phosphohydrolase 1; D-fructose-1; EC 3.1.3.11; F16P1_HUMAN; FBP; FBP 1; FBP1; FBPase 1; Fructose 1 6 bisphosphatase 1; Fructose bisphosphatase 1; Fructose-1; Growth inhibiting protein 17; Liver fructose bisphosphatase.
小鼠脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠冠狀動脈平滑肌細(xì)胞
LS513人直腸癌細(xì)胞
人前列腺癌細(xì)胞；LAPC4
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。