實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
肺微血管內(nèi)皮細胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動具有重要意義。它還具有代謝功能，可以執(zhí)行一定的非呼吸功能。
在肺損傷中，肺微血管內(nèi)皮細胞是活性氧類的重要靶細胞之一。在肺炎的發(fā)生過程中，神經(jīng)體液介質(zhì)和氧化劑作用于內(nèi)皮細胞，使得細胞間隙滲透性增加，蛋白質(zhì)由血液進入間質(zhì)。細胞間隙滲透性的增加導(dǎo)致低氧血癥，出現(xiàn)呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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肺組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2288 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于實驗動物的正常肺組織。
2)細胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：上皮樣，多角形細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 內(nèi)皮 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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LSM5蛋白抗體
LSM5
轉(zhuǎn)錄因子BTF3抗體
BTF3
閱讀障礙相關(guān)蛋白Shootin抗體 Anti-Shootin/KIAA1598
環(huán)指蛋白35抗體 Anti-RNF35
神經(jīng)特異性轉(zhuǎn)錄因子DPF1抗體 Anti-Neuro D4/DPF1
鋅指蛋白ZBTB5抗體 Anti-ZBTB5
精子鞭毛蛋白2抗體
Sperm Flagellar 2
醌氧化還原酶樣蛋白1抗體
CRYZL1
紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白3抗體 Anti-SKA3
丙酮酸脫氫酶α1抗體 Anti-PDHA1/PDH-E1α
泌乳素抗體 Anti-PRL
金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體 Anti-TIMP-3
PE標(biāo)記雞IgG
羊肺微血管內(nèi)皮細胞GDH/GLDH ELISA Kit
豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)elisa分析檢測試劑盒
gamma Catenin; ARVD12; Catenin (cadherin associated protein) gamma 80kDa; Catenin (cadherin associated protein), gamma 80kDa; catenin (cadherin-associated protein) gamma (80kD); Catenin gamma 80kDa; Catenin gamma; Desmoplakin 3; Desmoplakin III; Desmoplakin-3; Desmoplakin3; DesmoplakinIII; DP 3; DP III; DP3; DPIII; Gamma catenin; Junction plakoglobin; JUP; PDGB; PKGB; PLAK_HUMAN; PLAKOGLOBIN; γ-Catenin; γ Catenin; Catenin γ; Catenin γ CTNNG.
羊肺微血管內(nèi)皮細胞
大鼠股動脈平滑肌細胞
ME-180人表皮樣癌細胞
人胃腸道間質(zhì)瘤細胞；GIST-T1
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。