實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
骨髓間充質干細胞是骨髓基質干細胞，對骨髓中的造血干細胞（HSC）不僅有機械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進間充質組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質等組織。
在骨髓中，BMSCs占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%~0.1%，含量極低。而同時，由于組織工程需要大量的種子細胞，從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術上的難度耀??
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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骨髓血組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2302 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常骨髓血組織。
2)細胞鑒定：CD44熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 間質 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠白介素12(IL-12/P40)elisa檢測試劑盒
人骨鈣素（Osteocalcin）elisa檢測試劑盒
組織科薩基病毒B（Coxsackievirus B）定量PCR擴增檢測試劑盒
魚11-酮睪酮(KT)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠神經(jīng)生長因子誘導蛋白B(NGFIB)elisa檢測試劑盒
分泌素抗體 Anti-Secretin
脫氫酶13抗體 Anti-RDH13
軸突蛋白1β/Neurexin 1β抗體 Anti-Neurexin 1 beta
包含氧化還原酶的WW域抗體 Anti-WWOX
鈉鉀離子轉運蛋白1抗體 NKCC1/SLC12A2
內(nèi)皮細胞粘附分子抗體 ESAM
FITC標記人TDT單克隆抗體 human TDT/FITC
FUT5抗體 FUT5
亞鐵氧化酶抗體 Hephaestin
胰島素樣生長因子-II抗體 IGF2
電壓門控性鉀通道蛋白Kv1.4抗體 Kv1.4
多聚腺苷酸結合蛋白抗體 PABP
通用轉錄因子2H亞基3/TTFIIH p34抗體 GTF2H3
突觸融合結合蛋白6抗體 Amisyn
REG3G單克隆抗體 REG3G
S100鈣結合蛋白A12抗體 S100A12
5-羥色胺受體3B抗體 5HT3B receptor
9號染色體開放閱讀框174抗體 C9orf174
甲基化CpG結合蛋白抗體 MBD1
解旋酶DEAD5抗體 DDX19B
大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)elisa檢測試劑盒
羊骨髓間充質干細胞Rabbit Anti-Horse IgG H&L / Gold
GALNT3蛋白抗體
BRI3-binding protein; HCCR-1; HCCR1; HCCRBP-1; I3-binding protein; Cervical cancer 1 proto-oncogene-binding protein KG19; I3-binding protein; BRI3B_HUMAN; BRI3BP.
羊骨髓間充質干細胞
大鼠宮頸上皮細胞
MOG-G-UVW人腦部多形性成釉細胞瘤細胞
人涎腺腺樣囊性癌細胞；SACC-LM
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。