ELISA樣本組織勻漿處理
ELISA樣本組織勻漿處理:
1、 采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結(jié)締組織,稱取組織塊。
2、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天熱時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。
3 、勻漿的方式有多種:
a) 、手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。
b)、 機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000r/min上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時(shí)間。
c)、 超聲粉碎:用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用40安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。
4、 將制備好的10%勻漿用離心機(jī)4℃,3000rpm離心15min,將離心好的勻漿小心收集上清,棄下面沉淀。
5、 取上清并分裝保存?zhèn)溆?,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。