人Ⅳ型膠原ELISA試劑盒操作要點：

1、為保證檢測結(jié)果的準確性，建議標準品及樣本均設(shè)雙孔測定。每次檢測均需做標準曲線。

2、 如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣本稀釋液進行稀釋，以使樣本符合試劑盒的檢測范圍，zui后計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

3、 加樣：加樣時，請使用一次性的潔凈吸頭，避免交叉污染。加樣時應盡量輕緩，避免起泡，將樣本加于酶標板孔底部，切勿沿孔壁加樣。一次加樣時間zui 好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4、 溫育：為防止樣本蒸發(fā)或污染，溫育過程中酶標板必須覆上板貼，實驗過程中酶標板應避免處于干燥的狀態(tài)。溫育過程中應隨時觀察溫箱溫度是否恒定于37℃，及時調(diào)整。溫育過程中，溫箱不易開啟太多次，以免影響溫度平衡。

5、洗滌：洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

1）、 手工洗板方法：吸去（不可觸及孔壁和孔底）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液按200μL/孔注入孔內(nèi)，浸泡2分鐘。根據(jù)操作步驟中所述，重復此過程數(shù)次。

2）、 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

4.6 顯色：為保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。可在加入底物溶液后每隔一段時間觀察一下顯se 情況以控制反應時間（比如每隔10分鐘）。當肉眼可見標準品前3-4孔有明顯梯度藍色，后3-4孔顯色不明顯時，即可加入終止液終止反應，此時藍色立刻變?yōu)辄S色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。

7、 底物溶液應為淺藍色或無色，如果顏色嚴重變深則必須棄用。底物溶液易受污染，請避光妥善保存。