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ELISA顯色操作分析

日期:2024-10-23 01:29
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摘要:ELISA顯色操作分析

大多數(shù)情況下ELISA商品多選用HRP 和堿性磷酸酶(ALP)。HRP可催化的底物為過(guò)氧化氫,參加反應(yīng)的顯色供氫體有鄰苯二胺(OPD)、鄰聯(lián)甲苯胺(OT)及四甲基聯(lián)苯胺(TMB)等。其中OPD 難溶于水,見(jiàn)光易變質(zhì),使用前配制,反應(yīng)過(guò)程須避光且OPD有一定毒性。TMB 的反應(yīng)產(chǎn)物為藍(lán)色,目視對(duì)比鮮明,其性質(zhì)穩(wěn)定,對(duì)人體無(wú)毒。若選用各類(lèi)酸性終止液,則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。TMB作底物時(shí)的產(chǎn)物檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm ,ALP 作為標(biāo)記物,其底物一般采用對(duì)硝基苯磷酸酯(pNPP),產(chǎn)物為黃色的對(duì)硝基酚,吸收波長(zhǎng)是405 nm。為了保證結(jié)果的穩(wěn)定性,必須要嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的溫度和時(shí)間操作,不可隨意改變溫度和時(shí)間。

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