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RT-qPCR原理的主要步驟分述

日期:2024-10-23 02:06
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摘要: RT-qPCR原理的主要步驟分述: 1、反轉(zhuǎn)錄: 1)、使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。 2)、該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴(kuò)增的DNA形式。 3)、反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中使用特定引物。 2、PCR擴(kuò)增: 1)、使用特定引物對(duì)cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,這些引物環(huán)繞目標(biāo)區(qū)域。 2)、PCR是一個(gè)循環(huán)過(guò)程,呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增DNA模板的數(shù)量。 3)、PCR反應(yīng)中包含熒光染料或探針,它們結(jié)合到擴(kuò)增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號(hào)。 3、 熒光實(shí)時(shí)檢測(cè): 1)、使用實(shí)時(shí)PCR儀器實(shí)...

RT-qPCR原理的主要步驟分述:

1、反轉(zhuǎn)錄:

1)、使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。

2)、該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴(kuò)增的DNA形式。

3)、反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中使用特定引物。

2、PCR擴(kuò)增:

1)、使用特定引物對(duì)cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,這些引物環(huán)繞目標(biāo)區(qū)域。

2)、PCR是一個(gè)循環(huán)過(guò)程,呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增DNA模板的數(shù)量。

3)、PCR反應(yīng)中包含熒光染料或探針,它們結(jié)合到擴(kuò)增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號(hào)。

3、 熒光實(shí)時(shí)檢測(cè):

1)、使用實(shí)時(shí)PCR儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)。

2)、熒光的數(shù)量與每個(gè)PCR循環(huán)中擴(kuò)增的DNA數(shù)量成比例。

3)、使用專(zhuān)業(yè)軟件分析數(shù)據(jù)以確定循環(huán)閾值(Ct)值,該值表示熒光信號(hào)達(dá)到特定閾值水平所需的循環(huán)數(shù)。Ct值用于計(jì)算原始樣品中存在的目標(biāo)DNA量,從而允許進(jìn)行基因表達(dá)或病毒載量等定量分析。


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