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逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)優(yōu)化及注意事項(xiàng)

日期:2024-10-23 01:46
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摘要: 逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription)是以 RNA 為模板合成 DNA 的過(guò)程,即 RNA 指導(dǎo)下的 DNA 合成。優(yōu)化及注意事項(xiàng): 1、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 時(shí),提取 RNA 是關(guān)鍵,需分離高質(zhì)量 RNA(純度和完整性)。 2、整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。 3、 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中要謹(jǐn)防 RNA 酶的污染,加入 RNA 酶抑制劑。 4、 為了防止非特異性擴(kuò)增,必須設(shè)陰性對(duì)照。 5、逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程在冰上操作完成,操作過(guò)程應(yīng)避免 RNase 污染。 6、 提高...

逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription)是以 RNA 為模板合成 DNA 的過(guò)程,即 RNA 指導(dǎo)下的 DNA 合成。優(yōu)化及注意事項(xiàng):

1、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 時(shí),提取 RNA 是關(guān)鍵,需分離高質(zhì)量 RNA(純度和完整性)。


2、整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。


3、 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中要謹(jǐn)防 RNA 酶的污染,加入 RNA 酶抑制劑。


4、 為了防止非特異性擴(kuò)增,必須設(shè)陰性對(duì)照。


5、逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程在冰上操作完成,操作過(guò)程應(yīng)避免 RNase 污染。


6、 提高逆轉(zhuǎn)錄預(yù)熱溫度(也可根據(jù)相應(yīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行調(diào)整)。


7、 減少基因組 DNA 污染,可使用去基因組的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。

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