
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:西部馬腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P63552
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
液相法去內(nèi)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
小白菊內(nèi)酯 Parthenolide 20554-84-1,29552-41-8 質(zhì)量規(guī)格:>98%標(biāo)準(zhǔn)品
植物羥賴氨酸(HYL)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
玫瑰紅酸鈉 Rhodizonic acid sodium salt 523-21-7 質(zhì)量規(guī)格:AR
替加氟(標(biāo)準(zhǔn)品) Tegafur 17902-23-7 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
體液丙二醛(MDA)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
白樺脂酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Betulinic acid 472-15-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
富馬酸喹硫平 Quetiapine Fumarate 111974-72-2 質(zhì)量規(guī)格:>99%
D-胱氨酸 D-Cystine 349-46-2 質(zhì)量規(guī)格:0.98
甜菜寧(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%) Phenmedipham 13684-63-4 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%
DL-肉堿鹽酸鹽 DL-Carnitine hydrochloride 461-05-2 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
L-焦谷氨酸;氧脯氨酸 H-Pyr-OH 98-79-3 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
鹽酸苯達(dá)莫司?。?biāo)準(zhǔn)品) Bendamustine HCl 3543-75-7 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
環(huán)丁砜(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfolane 126-33-0 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8% (GC)
NEUROG基因甲基化程度定量分析試劑盒盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
替尼泊甙,替尼泊苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Teniposide 29767-20-2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
西部馬腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(顆粒) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于金黃色葡萄球的選擇性分離培養(yǎng)用途:用于金黃色葡萄球的選擇性分離培養(yǎng)。成分(g/L)胰酪胨 5.0動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物 5.0牛肉浸出粉 1.0D-甘露醇 10.0氯鈉 75.0酚紅 0.025瓊脂 15.0pH值7.4 ± 0.2 25℃用法:稱取本品 111g,加入1000ml純化水中,加熱溶解并不停攪拌煮沸 1 分鐘,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。規(guī)格:250g有效期: 三年
緩沖蛋白胨水(BPW)顆粒 英文名稱:Buffered Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 產(chǎn)品用途:用于阪崎桿前增培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))用途:用于沙門氏前增培養(yǎng),亦可用于李氏前增培養(yǎng)。成分(g/L)蛋白胨 10.0氯鈉 5.0磷酸氫二鈉(含12個(gè)結(jié)晶水) 9.0磷酸二氫鉀 1.5pH值7.2 ± 0.2 25℃
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Thioglycollate Medium 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 產(chǎn)品用途:用于藥品,生物制品無(wú)試驗(yàn),用于需氧、厭氧的培養(yǎng)用途:用于藥品、生物制品無(wú)檢測(cè),檢測(cè)好氧和厭氧。成分(g/L)酪胨(胰酶水解) 15.0酵母浸出粉 5.0葡萄糖 5.0硫乙醇酸鈉 0.5L-胱氨酸 0.5氯鈉 2.5刃天青 0.001瓊脂 0.75pH值7.1 ± 0.2 25℃
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Thioglycollate Medium 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 產(chǎn)品用途:用于藥品,生物制品無(wú)試驗(yàn),用于需氧、厭氧的培養(yǎng)用途:用于藥品、生物制品無(wú)檢測(cè),檢測(cè)好氧和厭氧。成分(g/L)酪胨(胰酶水解) 15.0酵母浸出粉 5.0葡萄糖 5.0硫乙醇酸鈉 0.5L-胱氨酸 0.5氯鈉 2.5刃天青 0.001瓊脂 0.75pH值7.1 ± 0.2 25℃
麥康凱肉湯USP顆粒 英文名稱:MacConkey Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于腸道致病的增培養(yǎng)用于腸道致病的增培養(yǎng)
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Rose Bengal Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 產(chǎn)品用途:用于霉、酵母計(jì)數(shù)用途:用于霉和酵母計(jì)數(shù)。成分(g/L)蛋白胨 5.0磷酸二氫鉀 1.0玫瑰紅鈉 0.0133硫酸鎂 0.5葡萄糖 10.0瓊脂 14.0pH值6.0 ± 0.2 25℃
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:10% Trypticase Soy Broth 產(chǎn)品規(guī)格:225ml/袋*10 產(chǎn)品用途:用于金黃色葡萄球的MPN測(cè)定及增培養(yǎng)用途:用于金黃色葡萄球增培養(yǎng)。成分(g/L)胰蛋白胨 17.0大豆蛋白胨 3.0氯鈉 100.0磷酸氫二鉀 2.5酸鈉 10.0葡萄糖 2.5pH值7.3 ± 0.2 25℃
麥康凱瓊脂(中國(guó)藥典)顆粒 英文名稱:MacConkey Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于腸道致病的選擇性分離培養(yǎng)用途:用于腸道致病的選擇性分離培養(yǎng)。成分(g/L)蛋白胨 20.0乳糖 10.0牛膽鹽 5.0氯鈉 5.0中性紅 0.03瓊脂 14.0pH值7.2± 0.2 25℃用法稱取本品 54.0g,加熱溶解于 1000ml 純化水(或蒸餾水)中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)顆粒 英文名稱:Tryptose Soya Agar 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 產(chǎn)品用途:一種通用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于各種微生物的培養(yǎng)(GB/T16294-2010)一種通用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于各種微生物的培養(yǎng)(GB/T16294-2010)
改良馬丁培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Martin Medium, Modified 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 產(chǎn)品用途:用于藥品及生物制品霉無(wú)檢驗(yàn)用途:用于生物制品霉無(wú)試驗(yàn)。成分(g/L)蛋白胨 5.0磷酸氫二鉀 1.0硫酸鎂 0.5酵母浸出粉 2.0葡萄糖 20.0pH值6.4 ± 0.2 25℃