實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：隱孢子蟲PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P63596
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

TRITC標(biāo)記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100微升

依托孕烯 Etonogestrel 54048-10-1 質(zhì)量規(guī)格：>98%

Metamorphosin A Metamorphosin A 157622-03-2 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

普拉格雷 Prasugrel 150322-43-3 質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR

鋱鹽（terbiumIII）單鏈DNA熒光定量測定試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

甘草酸二銨鹽（標(biāo)準(zhǔn)品） Diammonium Glycyrrhizate 79165-06-3 質(zhì)量規(guī)格：UV≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

N6-苯甲基腺苷 N6-Benzyl Adenosine  4294-16-0 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

基因拼接圖譜完全分析技術(shù)試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

細(xì)胞ZAP70激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

人體Stat1基因甲基化檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

酞菁銅(II)(α-型)(>90.0%(T)) Copper(II) Phthalocyanine (α-form) 147-14-8 質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(T)

地美司鈉 Dimesna  16208-51-8 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

通用型賴氨酸（lysine）含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

醋酸甲地孕酮-d3 Megestrol Acetate-d3 595-33-5 (unlabeled) 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

石蠟切片總膽固醇舒爾茨間接染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

隱孢子蟲PCR檢測試劑盒2.5L微需氧產(chǎn)氣包 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10個/包 產(chǎn)品用途：用于微需氧微生物的培養(yǎng)用途:本品為2.5L微需氧產(chǎn)氣包，用于為微生物微需氧培養(yǎng)構(gòu)造微需氧環(huán)境。微生物微需氧/厭氧培養(yǎng)需要厭氧培養(yǎng)袋，微需氧/厭氧產(chǎn)氣包，氧氣指示劑配套使用，才可進行試驗。微需氧/厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)：操作步驟圖：注意事項：1. 2.5L微需氧培養(yǎng)袋建議裝10個培養(yǎng)皿，但應(yīng)不少于4個。2. 若采用大于2.5L的培養(yǎng)袋，應(yīng)根據(jù)其體積相應(yīng)的增加微需氧產(chǎn)氣包的數(shù)量。當(dāng)使用多個產(chǎn)氣包時，不要疊放在一起。3. 微需氧培養(yǎng)的溫度不超過45℃。儲存方法：置陰涼干燥處密封保存。

350ml厭氧培養(yǎng)袋 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10個/包 產(chǎn)品用途：用于厭氧微生物的培養(yǎng)用途：本品為350ml厭氧培養(yǎng)袋，用于微生物的厭氧培養(yǎng)。微生物厭氧培養(yǎng)需要厭氧培養(yǎng)袋，厭氧產(chǎn)氣包，氧氣指示劑配套使用，才可進行試驗。

SB培養(yǎng)基 英文名稱：SB Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于基因工程大腸桿培養(yǎng)，營養(yǎng)非常豐富用途:用于基因工程大腸桿培養(yǎng),營養(yǎng)非常豐富。用法稱取本品 57.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

TB培養(yǎng)基 英文名稱：TB Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于基因工程大腸桿培養(yǎng)，營養(yǎng)豐富用途:用于基因工程大腸桿培養(yǎng),營養(yǎng)豐富。用法稱取本品 47.6g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

LB瓊脂（lennox） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于分子生物學(xué)中大腸桿的培養(yǎng)用途：用于發(fā)酵工程、基因工程和分子生物學(xué)中大腸桿的培養(yǎng)。成分(g/L)：胰蛋白胨 10.0酵母浸粉 5.0氯鈉 5.0瓊脂 15.0ph7.2±0.2 25℃用法：稱取本品35.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅15min，備用。

LB肉湯（Lennox） 英文名稱：LB Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于分子生物學(xué)中大腸桿培養(yǎng)用途:用于分子生物學(xué)中大腸桿培養(yǎng)。成分(g/L)胰蛋白胨 10.0酵母浸粉 5.0氯鈉 5.0pH值7.3 ± 0.2 25℃用法稱取本品20.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅15分鐘,備用。

SOB培養(yǎng)基 英文名稱：SOB Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于基因工程大腸桿培養(yǎng)用途:用于基因工程大腸桿培養(yǎng)。用法稱取本品 26.6g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

2×YT肉湯 英文名稱：2×YT Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于基因工程大腸桿培養(yǎng)用途:用于基因工程大腸桿培養(yǎng)。用法稱取本品 31.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

噻孢霉素 英文名稱：Cefotaxime 產(chǎn)品規(guī)格：1.25μg/支 產(chǎn)品用途：每100ml無山梨酸麥康凱瓊脂基礎(chǔ)中加入1瓶噻孢霉素每100ml無山梨酸麥康凱瓊脂基礎(chǔ)中加入1瓶噻孢霉素（1.25ug），混勻，無分裝于滅試管。

三糖鐵（TSI）瓊脂 英文名稱：TSI Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：生化培養(yǎng)基，用于腸桿科細(xì)的生化反應(yīng)篩選（GB標(biāo)準(zhǔn)）用途:用于腸桿科細(xì)的生化反應(yīng)篩選。成分(g/L)蛋白胨 15.0牛肉粉 3.0酵母粉 3.0氯鈉 5.0月示胨 5.0乳糖 10.0葡萄糖 1.0蔗糖 10.0酚紅 0.025硫酸亞鐵 0.2硫代硫酸鈉 0.3瓊脂 12.0pH值7.4 ± 0.1 25℃用法稱取本品 64.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,加熱煮沸 1分鐘,分裝于 16mm× 150mm 試管,121℃高壓滅 15分鐘制成斜面長 4-5cm,底部長2-3cm。