實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：東部馬腦炎病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P63600
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
AV-951 Tivozanib, AV951 475108-18-0 質(zhì)量規(guī)格：>98%,VEGFR抑制劑
霉酚酸酰基 β-D-葡萄糖苷酸 Mycophenolic Acid Acyl-β-D-glucuronide 99043-04-6 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
蛋白雜交封閉溶液 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：100毫升
1-十五烯(>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Pentadecene 13360-61-7 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
植物磷酸葡萄糖變位酶（phosphoglucomutase；PGM）活性光譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
(R)-(+)-1-苯乙醇(>98.0%(GC)) (R)-(+)-1-Phenylethyl Alcohol 1517-69-7 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN-38) SN38(7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin ) 86639-52-3 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,BR
心房利鈉肽（126-149） Atrial Natriuretic Peptide (126-149) (rat) 91421-87-3 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
5-氯氫氯噻嗪 5-Chloro Hydrochlorothiazide 5233-42-1 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
磷酸氫二鈉十二水(>98%,BR) Sodium phosphate, dibasic, dodecahydrate 10039-32-4 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/l,溶劑：1%硫酸） Copper solution 7758-98-7 質(zhì)量規(guī)格：1000mg/l,溶劑：1%硫酸
D-蟲熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽 D-Luciferin sodium salt 103404-75-7 質(zhì)量規(guī)格：>98%
O-6-芐基鳥嘌呤，MGMT 的抑制劑 6-O-Benzylguanine(O6BG) 19916-73-5 質(zhì)量規(guī)格：>98%,MGMT 的抑制劑
物質(zhì)P（7-11） Substance P (7-11) 51165-05-0 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
磷酸三丁酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Tributyl phosphate 126-73-8 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
果菜L-天門冬酰胺化學(xué)比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
東部馬腦炎病毒PCR檢測試劑盒m-TGE肉湯 英文名稱：m-TGE Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于奶制品中濾膜法細(xì)總數(shù)計(jì)數(shù)用途:濾膜法計(jì)數(shù)牛奶和乳制品中用法稱取本品 18.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：Water Plate Count Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于飼料中細(xì)總數(shù)測定水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基是公司改良的培養(yǎng)基。用于飼料中細(xì)總數(shù)測定。
R2A瓊脂 英文名稱：R2A Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于飲用水中細(xì)總數(shù)測定(USP、EP方法)用途:用于飲用水中細(xì)總數(shù)的計(jì)數(shù)。用法：稱取本品 15.2g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅15 分鐘,備用。注：滅后稍渾濁。
TGE瓊脂 英文名稱：TGE Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于細(xì)總數(shù)測定用途:用于細(xì)總數(shù)檢測。用法稱取本品 24.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
CVT瓊脂 英文名稱：CVT Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于乳制品中嗜冷的計(jì)數(shù)用途用于乳制品中嗜冷計(jì)數(shù)。用 法稱取本品 23.5克，加熱溶解1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅15分鐘， 待冷至50℃傾入無平皿，備用。注意：用涂布法計(jì)數(shù)；在20-25℃培養(yǎng)48-72小時，計(jì)數(shù)顯紅色落。
酵母粉瓊脂 英文名稱：Yeast Extract Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于水中細(xì)總數(shù)的檢測(ISO標(biāo)準(zhǔn))用途:用于水中微生物總數(shù)檢測。用法稱取本品 24.0g,加熱溶于1000m蒸餾水中,121℃高壓滅15分鐘,冷至 45±1℃時,保溫于 45℃水浴中,保溫時間不要超過 4 小時。
平板計(jì)數(shù)瓊脂（含麥芽提取物） 英文名稱：Plate Count Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于落總數(shù)測定。成分(g/L)胰蛋白胨 5.0麥芽浸粉 2.5葡萄糖 1.0瓊脂 15.0pH值7.0 ± 0.1 25℃用法：稱取本品 23.5g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝 ,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
2216E液體培養(yǎng)基 英文名稱：2216E Liquid Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于海生細(xì)的增培養(yǎng)用途用于海生細(xì)的增培養(yǎng)。用 法稱取本品 37.4克，加熱溶解1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅15分鐘，備用。
嗜冷計(jì)數(shù)瓊脂 英文名稱：Psychrophilic bacteria count agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于乳制品中嗜冷落總數(shù)和需氧芽孢總數(shù)的測定用途:用于乳制品中嗜冷落總數(shù)和需氧芽孢總數(shù)的測定。用法稱取本品 24.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘, 備用。
NA培養(yǎng)基(含葡萄糖) 英文名稱：NA Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于落總數(shù)測定1、產(chǎn)品用途：用于落總數(shù)測定。2、產(chǎn)品用法：稱取本品28.5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅15min，備用。