
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腦膜炎奈瑟菌PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P63634
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
辛伐他汀 Simvastatin 79902-63-9 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)
鹽酸米安色林(標(biāo)準(zhǔn)品) Mianserin hydrochloride 21535-47-7 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
血液3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶活性直接比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體局灶法動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:5次
白細(xì)胞焦激肽(4-8);Pheromonotropic五肽 Leucopyrokinin (4-8);Pheromonotropic Pentapeptide 104191-78-8 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
組織HSV2(HERPES SIMPLX2)病毒定性檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
6-FAM ;6-羧基熒光素 6-Carboxyfluorescein 3301-79-9 質(zhì)量規(guī)格:0.95
鹽酸丁卡因(標(biāo)準(zhǔn)品) Tetracaine HCl 136-47-0 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
組織基質(zhì)金屬蛋白酶 3H同位素標(biāo)記檢測(cè)試劑盒(不包括同位素) 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
石蠟切片組織JNK/SAPK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
蛋白激酶C(19-36);蛋白激酶C選擇性抑制蛋白 Protein Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein 113731-96-7 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
鹽酸艾司洛爾 Esmolol HCl 81161-17-3 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
達(dá)沙替尼(無(wú)水)(標(biāo)準(zhǔn)品) Dasatinib 302962-49-8 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
維多利亞藍(lán)B,堿性藍(lán) 26 Victoria blue B 2580-56-5 質(zhì)量規(guī)格:BS
活體細(xì)胞線粒體長(zhǎng)期跟蹤試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
腦膜炎奈瑟菌PCR檢測(cè)試劑盒1%TTC溶液 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:1ml/支*5 產(chǎn)品用途:每支添加于100mlKF鏈球瓊脂中每支添加于100ml KF鏈球瓊脂中
草酸鉀兔血漿 英文名稱:Potassium Oxalate In Rabbit Plasma 產(chǎn)品規(guī)格:0.2ml*20 產(chǎn)品用途:用于溶血性鏈球的檢驗(yàn)用于溶血性鏈球的檢驗(yàn)
哥倫比亞CNA血瓊脂 英文名稱:哥倫比亞血瓊脂 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于溶血性鏈球、金黃色葡萄球的分離培養(yǎng)用于溶血性鏈球、金黃色葡萄球的分離培養(yǎng)(GB4789.11-2014)
改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(mTSB) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于溶血性鏈球增培養(yǎng)用途:用于β型溶血性鏈球增培養(yǎng)。成分:胰蛋白胨 17.0大豆蛋白胨 3.0氯鈉 5.0無(wú)水磷酸二氫鉀 2.5葡萄糖 2.5pH值7.3 ± 0.2 25℃用法:稱取本品 30.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝于三角瓶或其他合適的容器中,每瓶225ml,121℃高壓滅 15分鐘,冷卻后,每225ml培養(yǎng)基中加入無(wú)多粘素 2.25 mg和萘啶酮酸 2.25 mg,混勻,備用。
萘啶酮酸2.25mg 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:2.25mg/支*5 產(chǎn)品用途:改良胰蛋白胨大豆肉湯的添加劑改良胰蛋白胨大豆瓊脂的添加劑
胰蛋白胨大豆肉湯 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:一種通用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于多種微生物的增培養(yǎng)。用途:一種通用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于多種微生物的增培養(yǎng)。成分(g/L)Pancreatic digest of casein/胰酶水解的酪素 17.0Papaic digest of soya bean/胃酶水解的大豆 3.0Sodium choride/ 氯鈉 5.0Dipotassium hydrogen phosphate /磷酸氫二鉀 2.5Glucose monohydrate/一水葡萄糖 2.5pH值7.3 ± 0.2 25℃用法Suspend 30g/liter, autoclave 15 min at 121℃). 稱取本品 30.0g,加熱溶解于 1000ml 純化水中,分裝,121℃ 高壓滅 15 分鐘,備用。