
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:肺炎鏈球菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P63640
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
吉拉爾特試劑T Girard’s reagent T 123-46-6 質量規(guī)格:0.98
酵母超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
黃花敗醬甙C;牡丹草苷B(標準品) Scabioside C 17233-22-6 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
組織砷元素比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織結構型內皮細胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
3,5-二碘-L-酪氨酸 3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrate 18835-59-1 質量規(guī)格:>98%,BR
FMOC-3,5-二碘-L-酪氨酸 FMoc-Tyr(3,5-I2)-OH 103213-31-6 質量規(guī)格:>98%,BR
β-半乳糖苷酶 β-Galactosidase 2604851 質量規(guī)格:700u/mg,羅氏分裝
阿尼芬凈 Anidulafungin 166663-25-8 質量規(guī)格:>98%,BR
普伐他汀 Pravastatin 81093-37-0 質量規(guī)格:美國進口
熒光定量PCR分析 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20樣本
細胞松弛素C(>98%,BR) Cytochalasin C 22144-76-9 質量規(guī)格:>98%,BR
血液乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
LEIBOVITZ’S L15培養(yǎng)基 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1/10升(片劑)
尼莫地平 Nimodipine 66085-59-4 質量規(guī)格:>98.5%,可用于細胞培養(yǎng)
組織凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTOR IIa)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
肺炎鏈球菌PCR檢測試劑盒乳糖肉湯 英文名稱:Lactose Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于食品中沙門氏檢驗前增用途用于食品中沙門氏檢驗前增培養(yǎng)。成分(g/L)蛋白胨 5.0g乳糖 5.0g牛肉粉 3.0gPH值 6.9±0.2用 法稱取本品 13 克,溶解于1000ml蒸餾水中, 分裝試管,116℃高壓滅15分鐘備用。
煌綠瓊脂 英文名稱:Brilliant Green Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于沙門氏的分離培養(yǎng)用途用于沙門氏(除傷寒沙門氏和志賀氏外)分離培養(yǎng)。成分(g/L)胰酪蛋白胨 5.0g蛋白胨 5.0g酵母粉 3.0g氯鈉 5.0g乳糖 10.0g蔗糖 10.0g亮綠 0.0125g紅 0.08g瓊脂 20.0gPH值 6.9±0.2用 法稱取本品 58.0克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅15分鐘,冷至50℃左右,傾入無平皿。本培養(yǎng)基當天使用。質量控制和典型特征在35℃培養(yǎng)18-24小時,沙門氏典型特征為紅色落,大腸桿呈黃色至綠色。
去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽瓊脂 英文名稱:Desoxycholate Citrate Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于沙門氏的分離培養(yǎng)用途用于革蘭氏陰性腸桿的分離培養(yǎng)。用 法稱取本品 69.52克, 加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中,煮沸1分鐘,冷至50℃左右時,傾入無平皿,無需高壓滅。質量控制和典型特征:在37℃培養(yǎng)18-24小時,沙門氏典型特征為無色透明落,大腸桿為粉紅色落,并有膽鹽沉淀環(huán),志賀氏典型特征為無色透明落。
吲哚培養(yǎng)基(蛋白胨水) 英文名稱:Indole Medium 產(chǎn)品規(guī)格:10g 產(chǎn)品用途:該產(chǎn)品已停產(chǎn),用GS001代替用途:用于細靛基質試驗成份(g/L)胰酪蛋白胨 10.0氯鈉 5.0L-色氨酸 0.5pH值7.3-7.5 25℃用法稱取本品 1.55g ,加熱溶解于 100ml 蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅15分鐘,備用。
EF-18瓊脂 英文名稱:EF-18 Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于濾膜法檢測食品中沙門氏(SN/T1059.1)產(chǎn)品用途:用于濾膜法檢測食品中沙門氏產(chǎn)品用法:稱取本品 55.9g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,冷至 50℃左右時,傾入無平皿,備用。貯存方法:請放置陰涼干燥處保存
RVS肉湯 英文名稱:RVS Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于食品中沙門氏檢驗選擇性增(ISO標準)用途:用于沙門氏的選擇性增培養(yǎng)。用法稱取本品 27.1g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,充分混勻,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,保存于 4 -10℃冰箱,備用。注:放置于 42℃水浴培養(yǎng)。
MKTTn肉湯(ISO) 英文名稱:MKTTn Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于食品中沙門氏檢驗選擇性增(ISO標準)用途:用于食品中沙門氏選擇性增培養(yǎng)。用法稱取本品 89.5g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,迅速冷卻,此溶液在 2-8℃可保存 4 周,臨用前加入 20ml碘液(5g 碘化鉀溶解于 2ml蒸餾水,然后加入 4g 碘,加蒸餾水至 20ml),混勻,分裝試管,每管 10ml,當天制備當天使用,無需高壓滅。