
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:口蹄疫病毒A血清型PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P63688
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
冰凍切片組織P16蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
食物環(huán)氨酸(cyclamate)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
N-去甲伊馬替尼-d8 N-Desmethyl Imatinib-d8 404844-02-6 (unlabeled) 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
GST融合蛋白陽性表達樹脂電泳篩選試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
石蠟切片組織衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅(ZIEHL-NEELSEN)原位直接染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
仙茅苷 Curculigoside 85643-19-2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
鬼臼(85%) Podophyllotoxin 518-28-5 質(zhì)量規(guī)格:>85%,BR
生物素核酸蛋白結(jié)合反應(yīng)試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
氫氧化鎂(>99%,BR) Magnesium hydroxide 1309-42-8 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
三唑磷(分析標準品,>97%(HPLC)) Triazophos 24017-47-8 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,>97%(HPLC)
同位素核酸蛋白結(jié)合凝膠遷移電泳分析(EMSA)試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
去甲基氯化西酞普蘭鹽酸鹽 Demethylchloro Citalopram Hydrochloride 64372-52-7 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
組織因子(TISSUE FACTOR)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
頭孢替坦 Cefotetan acid 69712-56-7 質(zhì)量規(guī)格:Potency>960 mg,JP
甲基帕羅西汀 N-Methyl Paroxetine 110429-36-2 質(zhì)量規(guī)格:>99%
冰凍切片組織COLLAGEN II蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
口蹄疫病毒A血清型PCR檢測試劑盒FB1(Half-Fraser)添加劑(A、B) 英文名稱:FB1 additive(A、B) 產(chǎn)品規(guī)格:2ml*40 產(chǎn)品用途:A、B各取一支添加于225mlFraser培養(yǎng)基或Half-Fraser培養(yǎng)基中A、B各取一支添加于225ml Fraser培養(yǎng)基或Half-Fraser培養(yǎng)基中
血液瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱:Blood agar base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:加5%-8%血液制成血平板用途:用于分離營養(yǎng)要求較高的致病。成分(g/L)胰蛋白胨 15.0大豆蛋白胨 5.0氯鈉 5.0瓊脂 13.0pH值7.3 ± 0.1 25℃用法稱取本品38.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘,冷至 50-55℃時無操作加入 5%-10% (V/V) 預(yù)溫至 37℃的無脫纖維羊血,混勻,傾入無平皿。
3%過氧化氫酶試劑 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:2ml*20支 產(chǎn)品用途:用于細的過氧化氫酶試驗用于細的過氧化氫酶試驗
SIM動力培養(yǎng)基 英文名稱:SIM power medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于動力試驗用途:用于、動力、吲哚試驗。成分(g/L)胰胨 20.0多價胨 6.0硫酸鐵銨 0.2硫代硫酸鈉 0.2瓊脂 3.5pH值7.2 ± 0.2 25℃用法稱取本品 30.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅 15 分鐘備用。
檸檬酸鐵銨(0.05g/支) 英文名稱:ironcitrate 產(chǎn)品規(guī)格:1ml/支*5 產(chǎn)品用途:添加于100mlMFB培養(yǎng)基中添加于100ml MFB培養(yǎng)基中
LEB肉湯 英文名稱:Listeria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)月示胨 5.0胰蛋白月示 5.0酵母浸粉 5.0牛肉浸粉 5.0氯鈉 20.0磷酸氫二鈉 12.0磷酸二氫鉀 1.35七葉苷 1.0萘啶酮酸 0.02pH值7.3 ± 0.1 25℃用法稱取本品 54.4g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘,分裝,每瓶 225ml,冷至室溫,加入 1支黃素(2.7mg/支),混勻,備用。
李斯特氏增肉湯(LEB) 英文名稱:Listeria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)用途:用于李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)胰胨 17.0多價胨 3.0酵母浸粉 6.0氯鈉 5.0磷酸氫二鉀 2.5葡萄糖 2.5鹽酸黃素 0.015萘啶酮酸 0.04pH值7.3 ± 0.2 25℃用法稱取本品 36.1g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝每瓶 225ml,121℃高壓滅 15 分鐘,冷卻,備用。
PALCAM肉湯 英文名稱:PALCAM Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于單增李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)用途:用于單增李斯特氏的選擇性增培養(yǎng)。成分(g/L)特殊蛋白胨 23.0酵母浸粉 5.0氯鋰 10.0七葉苷 0.8檸檬酸鐵銨 0.5甘露醇 5.0紅 0.08大豆卵磷脂 1.0吐溫80 2.0pH值7.4 ± 0.2 25℃用法稱取本品 47.38g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,每瓶 200ml,121℃高壓滅 15 分鐘,冷至 45-50℃左右時,加入1 套 PALCAM 肉湯添加劑(添加劑 1 和添加劑 2 ),混勻,備用。
PBS緩沖液(PH7.4) 英文名稱:PBS Solution 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于檢測李斯特氏時樣品的制備用途:用于檢測李斯特氏時樣品的制備。成分(g/L)磷酸氫二鈉 13.22g磷酸二氫鈉 0.6g氯鈉 85.0gpH值 7.4用 法稱取本品99克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,制備成10×PBS緩沖液。若制備成1 ×PBS緩沖液時,吸取100ml 10×PBS 溶液,加入900 ml 蒸餾水中,混勻(若PH值不在7.4時,請用酸堿糾正),分裝,121℃高壓滅15分鐘,備用。
7%羊血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱:7%Sheep Blood Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 產(chǎn)品用途:用于李斯特氏的溶血試驗用途用于李斯特氏的溶血試驗成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0氯鈉 5.0瓊脂 15.0pH 值 7.3±0.2 25℃用法:稱取本品 3.3g,加熱溶解于 100ml 蒸餾水中,充分混勻,121℃ 高壓滅 15 分鐘,冷至 50℃左右時, 加入 7% 的無脫纖維羊血,混勻后傾注平皿。