實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：肺炎鏈球菌(SP)PCR檢測試劑盒
產品規(guī)格：50T
產品貨號：FS-P64012
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
脫氫鹽酸尼卡地平 Dehydro Nicardipine Hydrochloride 59875-58-0 質量規(guī)格：美國進口
真/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格：20次
杜鵑花（rhododendron）完全培養(yǎng)基 進口/國產 規(guī)格：500毫升溶液/片劑
紅色熒光細胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格：500次
細胞5’－核苷酸酶（5’－NT）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格：20次
差異相減雜交試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次
鋅試劑 Zincon 62625-22-3 質量規(guī)格：AR
體液總膽汁酸酶循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格：20次
2,3-吡嗪二羧酸(>98.0%(HPLC)(T)) 2,3-Pyrazinedicarboxylic Acid 89-01-0 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)
碘化木蘭花堿 Magnoflorine iodide 4277-43-4 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
體液汞元素熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格：20次
奈達鉑;順糖氨鉑 Nedaplatin 95734-82-0 質量規(guī)格：>98%,BR
異辛醇(分析標準品,≥99.5%) 2-Ethyl-1-hexanol 104-76-7 質量規(guī)格：分析標準品,≥99.5%
拉西地平 Lacidipine 103890-78-4 質量規(guī)格：>99%,BR
N-芐氧羰基-L-纈氨酸-更昔洛韋 N-Carbobenzyloxy-L-valinyl-ganciclovir 194154-40-0 質量規(guī)格：美國進口
細胞TNF ALPHA蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10/20次
肺炎鏈球菌(SP)PCR檢測試劑盒S-Methyl-ITU.sulfate(iN0S 抑制劑 )50mg
SMT(iNOS 抑制劑 )100mg
SNP(NO 供體 )1g
SOD( 抗氧化酶 )65KU
Sodium Butyrate(HDAC 抑制劑 )1g
Sodium orthovanadate( 磷酸酯酶抑制劑 )2g
SP600125(JNK 抑制劑 )5mg
Spermidine.trihvdrochloride(nNOS 抑制劑 )1g
Staurosporine(PKC 抑制劑 )0.1mg
Superoxide dismutase( 抗氧化酶 )2mg