
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:登革熱病毒4型(DFV-IV)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P64074
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
組織RSK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
櫟櫻酸(標準品) Roburic acid 6812-81-3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
組織二胺氧化酶(DAO)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
瓜子金皂苷己(標準品) Polygalasaponin F 882664-74-6 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
苯噻草胺(標準品) Mefenacet 73250-68-7 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,98.5%
達卡他韋;BMS790052 Daclatasvir;BMS-790052; EBP883 1009119-64-5 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
細胞VZV(VARICELLA ZOSTER)病毒定性檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
LY2835219 LY2835219 1231930-82-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,CDK4 和CDK6選擇性抑制劑
寡核苷酸探針同位素法RNA北方雜交完全試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:5次
氧氟沙星(標準品) Ofloxacin 82419-36-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
4-羥基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-羧酸乙酯 1,1-二氧化物 4-Hydroxy-2H-1,2-benzothiazine-3-carboxylic acid ethyl ester 1,1-Dioxide 24683-21-4 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
杯[8]芳烴(>90.0%(HPLC)) Calix[8]arene 82452-93-5 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(HPLC)
組織堿性焦磷酸酶(Alkaline Pyrophosphatase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
三氟胸苷;三氟尿苷(TFT) Trifluridine; Trifluorothymidine 70-00-8 質(zhì)量規(guī)格:>98%
植物谷氨酰胺酶(glutaminase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
脫氧核糖核酸鈉(小牛胸腺) DNA.Na 73049-39-5 質(zhì)量規(guī)格:進分sigmaD1501
登革熱病毒4型(DFV-IV)PCR檢測試劑盒Phospho-BLNK(Tyr96) 磷酸化T細胞連接蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlLaminin B2 gamma 1 層粘連蛋白B2γ1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗生物素抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlNanog 胚胎干細胞關(guān)鍵蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Persephin PSP抗體 規(guī)格: 0.1mlMMP-7 基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-AQP2(Ser269) 磷酸化水通道蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlBCMA/CD269 B細胞成熟因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
EPCR/CD201 內(nèi)皮細胞活化蛋白受體抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-EGFR (Tyr1092) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
SLC6A19 鉀依賴鈉鈣交換蛋白6 規(guī)格: 0.1mlVillin 絨毛蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-CHK2 (ser516) 磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體 規(guī)格: 0.1mlTFAR19/PDCD5 凋亡相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1mlFactor VIII 第八因子抗體 0.1ml
Donkey anti-human IgG whole serum 驢抗人IgG抗清 規(guī)格: 1mlCBFA1/RUNX2 核心結(jié)合因子α1抗體(成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子)Cbfα1 規(guī)格: 0.1ml
phospho-PRKCB(Ser642) 磷酸化蛋白激酶C抗體 規(guī)格: 0.1mlANKS6 錨蛋白重復及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml
HCV-NS1 丙型肝炎病毒-NS1抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-CREB-1(Ser121) 磷酸化CREB-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
HLC3/Kanadaptin 肺基因蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlPCDHGC3/PCDH2 原鈣粘蛋白γC3抗體 規(guī)格: 0.2ml
BTG1 B細胞遷移基因1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-IRAK4(Thr345) 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體 規(guī)格: 0.1ml
IL-6 白介素6 規(guī)格: 0.1mlRNF150 環(huán)指蛋白150抗體 規(guī)格: 0.2ml
MUC13 粘蛋白13抗體 規(guī)格: 0.2mlPAGE4/GAGE9 前列相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) 鹽酸克侖特羅/瘦肉抗體 0.1mlFAR2 脂肪酰輔酶A還原酶2抗體 規(guī)格: 0.2ml