本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬瘟病毒(CSFV)定性PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P64216
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
烏藥醚內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Linderane 13476-25-0 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
莫吉司坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Moguisteine 119637-67-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
6倍丙三醇DNA電泳上樣緩沖液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20毫升
DL-蘋(píng)果酸 DL-Malic acid 617-48-1 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
MCLA (>98.0%(HPLC)) MCLA 128322-44-1 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
乙酸銨(色譜級(jí)) Ammonium acetate 631-61-8 質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%
冰凍切片組織線粒體復(fù)合物II蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
N-乙酰-L-谷氨酰胺 N-Acetyl-L-Glutamine 2490-97-3 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
酸性品紅 Acid Fuchsin 3244-88-0 質(zhì)量規(guī)格:BS
20 倍 SSC分子生物級(jí)濃縮緩沖溶液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升
3-O-甲基 4-羥基雌二醇 3-O-Methyl 4-Hydroxy Estradiol 5976-66-9 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
通用型雞病毒性關(guān)節(jié)炎呼腸孤病毒(Reovirus;REO)基因檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
10-羥基華法林(非對(duì)映異構(gòu)體混合物) 10-Hydroxy Warfarin (Mixture of Diastereomers) 83219-99-2 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
四環(huán)素10-O-b-D-半乳糖皮蒽 Tetracycline 10-O-b-D-galactopyranoside 319426-63-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
動(dòng)物組織活性肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
5,6-二甲基-1-茚酮 5,6-Dimethoxy-1-indanone 2107-69-9 質(zhì)量規(guī)格:>99%
豬瘟病毒(CSFV)定性PCR檢測(cè)試劑盒phospho-MEF2C(Ser59) 磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-MKP1 (Ser318) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶1抗體 0.1ml
ABCF3 三磷酸苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體 規(guī)格: 0.2mlDHRS13 短鏈脫還原酶13抗體 規(guī)格: 0.2ml
DUT 脫氧尿苷三磷酸酶DUT抗體 規(guī)格: 0.1mlLck/p56-LCK 細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶抗體 規(guī)格: 0.2ml
SPHK1 鞘氨醇激酶1抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Goat IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/APC APC標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-human IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.3ml
GIPC-2 胞漿區(qū)相關(guān)蛋白GIPC2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-Tau protein(Ser422) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
MYH7 肌球蛋白重鏈7抗體 規(guī)格: 0.2mlCullin 5/CUL5 管加壓素激活鈣啟動(dòng)受體蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
UQCRFS1 質(zhì)子梯度調(diào)節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-rat IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml
PAX8 配對(duì)盒基因8抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-SHIP1 (Tyr1020) 磷酸化SH2結(jié)構(gòu)含磷酸肌醇SHIP1抗體 規(guī)格: 0.1ml
FAM153B FAM153B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-BACH1/BRIP1(Ser990) 磷酸化易感基因相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
LAIR-1/CD305 白細(xì)胞相關(guān)球蛋白樣受體1抗體 規(guī)格: 0.2mlF1 protein (YERSINIA PESTIS) 鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏莢膜抗原F1單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1ml
ITPR2 5-三磷酸肌醇受體2抗體 規(guī)格: 0.2ml
PRR15 富含脯氨酸蛋白15抗體 規(guī)格: 0.2ml
PTPN6/SHP1 蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體 規(guī)格: 0.1ml
CD48/SLAMF2 CD48抗體 規(guī)格: 0.2ml