產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):棘球蚴病(Ec)定性PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P64226
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)
N-乙酰-D-丙氨酸 N-Acetyl-D-alanine 19436-52-3 質(zhì)量規(guī)格:98%,BR
環(huán)境傷寒沙門(mén)氏A(Salmonella Paratyphi A)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
血液過(guò)氧化氫酶(CATALASE)過(guò)氧化活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
澳洲茄胺;澳州茄胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Solasodine 126-17-0 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
磷酸氯喹(標(biāo)準(zhǔn)品) Chloroquine diphosphate 50-63-5 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
TEM電鏡冰凍切片組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP間接檢測(cè)試劑盒(含AP二抗) 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
氟馬西尼/氟馬澤尼 Flumazenil 78755-81-4 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP31
組織DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
Amberlyst15離子交換樹(shù)脂(濕) Amberlyst 15 ion-exchange resin 9037-24-5 質(zhì)量規(guī)格:濕
飲料檸檬酸比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織HSV(HERPES SIMPLX)病毒定性檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
石蠟切片組織IL蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
普羅布考 Probucol 23288-49-5 質(zhì)量規(guī)格:>99%
鄰氯青霉素 ;氯唑西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate 7081-44-9 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
阿托伐他汀鈣 Atorvastatin calcium 134523-03-8 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
細(xì)胞無(wú)機(jī)磷/游離磷酸根離子比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
棘球蚴?。?/span>Ec)定性PCR檢測(cè)試劑盒cGMP 環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷抗體 規(guī)格: 0.2mlLipophilin B 親脂性蛋白B抗體 規(guī)格: 0.2ml
ACBD6 酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlC21orf87 21號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框87抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4 管**素3/管**素4抗體 規(guī)格: 0.1ml
PRKAG2/AMPKγ2 苷單磷酸活化蛋白激酶γ2抗體 規(guī)格: 0.2mlEphB1+EphB2 酪氨酸蛋白激酶受體B1+B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
FMDV Polyprotein (VPg2 protein) 口蹄疫病毒A型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MEF2C(Ser396) 磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格: 0.1ml
SIRT1/sirtuin 1 沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.1mlphospho-GATA-4(ser 262) 磷酸化GATA結(jié)合蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-MAP2(Ser136) 磷酸化微管相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlSLC25A20 線(xiàn)粒體二羧酸載體蛋白20抗體 0.1ml
C22orf31 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框31抗體 規(guī)格: 0.2mlASTE1 ASTE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Gax 生終止特異性同源盒基因抗體 規(guī)格: 0.2mlC17orf82 17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框82抗體 規(guī)格: 0.2ml
HSPA6 熱休克蛋白70家族蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格: 0.1mlTransketolase(CT) 轉(zhuǎn)酮醇酶(轉(zhuǎn)羥乙醛酶)抗體(C端) 規(guī)格: 1ml
Ube2L3 泛素蛋白連接酶L3抗體 規(guī)格: 0.2mlCLLD7 鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子CLLD7抗體 規(guī)格: 0.2ml
MAGP2 纖微絲相關(guān)糖蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlFrizzled 2 Wnt信號(hào)受體FZD2蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PNPT1 多核苷酸磷酸化酶蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL12RB2 白細(xì)胞介素-12受體β2抗體 規(guī)格: 0.1ml
E2 tag E2 tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1ml