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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:CaMV35S基因PCR檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:FS-P64280
  • 產(chǎn)品廠商:撫生
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
CaMV35S基因PCR檢測試劑盒注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
詳情介紹:

產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:CaMV35S基因PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T  0.1PCR管
產(chǎn)品貨號:FS-P64280
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。

實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

通用型雞火雞支原體(MM)基因檢測試劑盒  進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

血液鎂離子(Mg)濃度化學(xué)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次

辛胺(標準品) n-Octylamine 111-86-4 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC)

琥珀酸;丁二酸 Succinic acid 110-15-6  質(zhì)量規(guī)格:AR,>99%

血液總膽固醇酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

5'-三磷酸胞苷二鈉鹽 Cytidine-5'-triphosphate (CTP), disodium salt 652154-13-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級

L-賴氨酸 L-Lysine 56-87-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品

體外脘蛋白去糖基化試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

1H-環(huán)五[l]菲(>95.0%(GC)) 1H-Cyclopenta[l]phenanthrene 235-92-7 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)

組織乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

通用型豬胸膜肺炎(APP)基因檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

人血液球蛋白M(IgM)比濁法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

D-鹽酸伐昔洛韋 D-Valacyclovir Hydrochloride 124832-28-6 質(zhì)量規(guī)格:美國進口

異型南五味子丁素(標準品) heteroclitin D 140369-76-2 質(zhì)量規(guī)格:含量測定

磷酸三鉀 Potassium phosphate, tribasic 7778-53-2 質(zhì)量規(guī)格:>98%

冰凍切片組織IKB-ALPHA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次

CaMV35S基因PCR檢測試劑盒PYGL  肝糖原磷酸化酶抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-Src(Tyr529)  磷酸化Src原基因抗體 規(guī)格: 0.1ml

RNF14  環(huán)指蛋白14抗體 規(guī)格: 0.2mlNPC1/Niemann Pick C1  尼曼匹克C1前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

CTNNBL1/Beta catenin like 1  β連環(huán)蛋白樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlEphrin B  Ephrin B抗體 規(guī)格: 0.1ml

PDI/P4HB/ERBA2L/PDIA3  蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體 規(guī)格: 0.1mlPCDHA2  原鈣粘附蛋白α2抗體 規(guī)格: 0.2ml

LC3C  微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG/Cy7  Cy7標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

IL-1R1/CD121a/IL1 Receptor I  白介素1受體1抗體 規(guī)格: 0.1mlTyrosinase  酪氨酸酶抗體 規(guī)格: 0.1ml

YY1AP1/HCCA2  肝相關(guān)蛋白2抗體(轉(zhuǎn)錄因子YY1結(jié)合蛋白1抗體) 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Chicken IgG/Bio  生物素標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-human IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

CD105/Endoglin  CD105抗體 規(guī)格: 0.1ml

FAM82B  微管相關(guān)蛋白FAM82B抗體 規(guī)格: 0.2ml

H1N1 Matrix Protein 2/Influenza A bp1   A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PKMYT1(Thr495)  磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 規(guī)格: 0.1ml

CTCF  轉(zhuǎn)錄阻抑蛋白CTCF抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADCY6  苷酸環(huán)化酶6抗體 0.2ml

Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

NR2E1/Tailless  核受體蛋白NR2E1抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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