實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因油菜品系RT-73PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P64376
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

鈣離子膜通道鈉鈣交換體（NCX/線粒體）功能熒光檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

生長(zhǎng)抑素 Somatostatin Acetate 38916-34-6 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR,醋酸鹽形式

真/酵母細(xì)胞可溶性總核蛋白制備試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

三苯雙脒（標(biāo)準(zhǔn)品） tribendimidine 115103-15-6 質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測(cè)定

6'-羧基辛伐他汀 6'-Carboxy Simvastatin 114883-30-6 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

10,12-二十七二炔酸(>98.0%(GC)) 10,12-Heptacosadiynoic Acid 67071-94-7 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

中性紅 Neutral red 553-24-2 質(zhì)量規(guī)格：BS

L-細(xì)辛脂素(標(biāo)準(zhǔn)品) L-Asarinin 133-04-0 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

尼卡巴嗪  Nicarbazin  330-95-0 質(zhì)量規(guī)格：>98%

籠形視黃酸 Caged Retinoic Acid 1040124-47-7 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

全組織總脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

組織LYNB激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細(xì)胞APC蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

米格列醇 Miglitol 72432-03-2 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

細(xì)（桿肽）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

轉(zhuǎn)基因油菜品系RT-73PCR檢測(cè)試劑盒

MRP3  多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml

ENC1/KLHL35  外胚層神經(jīng)皮層蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

VMAT1/VAT1  嗜鉻顆粒胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VAT1抗體 規(guī)格: 0.1ml

DFF-40beta/CAD/CPAN  Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體 規(guī)格: 0.1ml

KiSS1R/GPR54  G蛋白偶聯(lián)受體54抗體 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-rabbit IgG  羊抗兔IgG 規(guī)格: 1mg

PEG10  肝高表達(dá)基因抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-NMDAR2A + 2B (Tyr1246 + Tyr1252)  磷酸化谷氨酸受體2A+2B抗體 規(guī)格: 0.1ml

Blood Group Lewis a  型Lewis a抗體 規(guī)格: 0.2ml

TGFβ1  轉(zhuǎn)化生因子β1抗體 規(guī)格: 0.1ml

lamin A/C  核纖層蛋白A/C抗體 規(guī)格: 0.2ml

LANPL  富含亮氨酸樣酸性核蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Twist2  TWIST蛋白2抗體抗體 規(guī)格: 0.2ml

SRFBP1  清應(yīng)答因子結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCDC129  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白129抗體 規(guī)格: 0.2ml

CHRNA3/AChRα3  堿型乙酰膽堿受體α3抗體 規(guī)格: 0.2ml