實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：沙門氏菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品貨號：FS-P64430
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

雷公藤內(nèi)酯酮（標(biāo)準(zhǔn)品） Triptonide 38647-11-9 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷)腺苷 3',5'-O-(1,1,3,3-Tetraisopropyl- 1,3-Disloxanediyl)Adenosine   69304-45-6 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

通用型沙門氏（Salmonellae）基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

水楊酸鈉(>99%,USP) Sodium salicylate 54-21-7 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP

溴脫氧尿嘧啶核苷（BrdU）溶液（10毫摩爾） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：1毫升

動物組織氫ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

溴夫定 Brivudine 69304-47-8 質(zhì)量規(guī)格：純度≥99.0%，含量≥98.5%

核酸氧化8-羥基鳥苷（8-OHG）ELISA分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：48/96次

通用化學(xué)封閉溶液 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：100毫升

(S)-(-)-馬來酸噻嗎洛爾 (S)-(-)-Timolol Maleate 50929-98-1 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

金標(biāo)準(zhǔn)溶液(100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液) Gold solution 7440-57-5 質(zhì)量規(guī)格：100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液

2,6-二甲基-3,5-庚二酮(>97.0%(GC)) 2,6-Dimethyl-3,5-heptanedione 18362-64-6 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

細(xì)胞FES激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

純化大鼠腎上腺髓質(zhì)素（AM）基因重組表達(dá)載體（pCMV5-AM）測序引物對 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：2 OD

遠(yuǎn)志皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品) Senegenin 2469-34-3 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

組織WNV（WEST NILE）病毒定性檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

沙門氏菌PCR檢測試劑盒LILRB3/CD85a/PirB  白細(xì)胞球蛋白樣受體-B抗體 規(guī)格: 0.2ml

IQGAP1  支架蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Bov IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.3ml

C6orf120  6號染色體開放閱讀框120抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-A Raf(Ser299)  磷酸化A-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-HER2(Tyr1248)  磷酸化HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

CXCR7/RDC1  細(xì)胞表面趨化因子受體7抗體 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Goat IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

phospho-c-Jun(Ser63)  磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1ml

Gigaxonin  巨軸索神經(jīng)病蛋白GAN抗體 規(guī)格: 0.2ml

TSHR (CT)  促甲狀素受體抗體（C端） 規(guī)格: 0.1ml

RbAp48  視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白P48抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADAM28  去整合素樣金屬蛋白酶28抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADNP/NAP  活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bov IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml