注意事項(xiàng):

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間zui好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．  如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)

服務(wù)：所有的檢測(cè)試劑盒均免費(fèi)代測(cè)，您只需要將您準(zhǔn)備好的樣本郵寄到我司即可！本地也可以上門收取樣本！全程檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)，免費(fèi)代做實(shí)驗(yàn)。本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。老客戶可享受優(yōu)惠折扣服務(wù)！

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞凋亡抑制因子5試劑盒

貨號(hào)：FS-021304

規(guī)格：96T/48T 

保存；2-8℃。

檢測(cè)目的：用于檢測(cè)血漿，血清及相關(guān)液體等樣本。例如灌洗液、腦脊液、血清、血漿、尿液、胸腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本.

檢測(cè)種屬：大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、等動(dòng)植物。

實(shí)驗(yàn)流程:

1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；

2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100μL，37°C孵育1小時(shí)；

3. 吸棄，加檢測(cè)溶液A100μL，37°C孵育1小時(shí)；

4. 洗板3次；

5. 加檢測(cè)溶液B100μL，37°C孵育30分鐘；

6. 洗板5次；

7. 加TMB底物90μL，37°C孵育10-20分鐘；

8. 加終止液50μL，立即450nm讀數(shù)。

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風(fēng)濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測(cè)抗原時(shí)，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。

操作流程：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 

（6）洗板，同（4）。 

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 

（9）洗板，同（4）。 

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 

（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

Rabbit Anti-human IgG/PE-Cy3PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人IgG 0.1ml

Rabbit Anti-MK IgM/Cy7Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1ml

Rabbit Anti-rat IgM/Alexa Fluor 488Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml

Donkey Anti-human IgG/AP堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的驢抗人IgG 0.1ml

Cholesterol膽固醇 100g

5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP)5-羥色胺 20mg

AEG-1 peptideAEG-1抗原 0.5mg

G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein)G蛋白（鳥苷酸結(jié)合蛋白）（抗原） 0.5mg

NPS/Neuropeptide S神經(jīng)肽S 0.5ml

BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)乳癌易感基因2抗原 0.5mg

CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta)巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β抗原 0.5mg

CK18(Cytokeratin 18)細(xì)胞角蛋白18(多肽) 0.5mg

細(xì)胞凋亡抑制因子5試劑盒通用試劑  七氟丁酸  Heptafluorobutyric acid,≥99.0%  375-22-4  5ML

通用試劑  長春堿衍生物  Conophylline(HPLC,≥98%)  142741-24-0  5MG

通用試劑  番石榴二醛  Guajadial  959860-49-2  5MG

通用試劑  β-丙氨酸  β-Alanine,99%  107-95-9  25G

通用試劑  L-丙氨酸乙酯鹽酸鹽  L-Alanine ethlester hydrochloride  1115-59-9  5G

通用試劑  N-硝基-L-精氨酸甲酯  Nω-Nitro-L-arginine methyl ester hydr...  51298-62-5  1G

通用試劑  L-瓜氨酸  L-Citrulline,≥98%  372-75-8  5G

通用試劑  D-鳥氨酸鹽酸鹽  D-Ornithine HCL,98%  16682-12-5  500MG

通用試劑  L-天冬氨酸鎂  L-Aspartic acid Mg salt,≥98%  2068-80-6  100G

通用試劑  L-天門冬氨酸鈉鹽  L-Aspartic acid sodium salt,≥98%  3792-50-5  25G

通用試劑  D-天冬氨酸  D-Aspartic acid,99%  1783-96-6  5G

通用試劑  DL-天冬氨酸  DL-Aspartic acid,≥99%  617-45-8  25G